FPLC ve HPLC arasındaki temel fark, FPLC'nin proteinler, nükleotidler ve pep titler gibi büyük biyomolekülleri saflaştıran bir tür sıvı kromatografisi olması, HPLC'nin ise küçük moleküler ağırlıklı bileşikleri ayıran bir tür sıvı kromatografisi olmasıdır.
Sıvı kromatografisi, bir numuneyi kendi bileşenlerine ayırmak için kullanılan bir tekniktir. Bu ayrılma, belirli numunelerin hareketli ve sabit fazlar ile etkileşimi nedeniyle oluşur. Bir numune içindeki bileşenler, sıvı kromatografide her bileşenin hareketli faz için afinitesine göre ayrılır. Mobil faz ve numune bir kolondan geçerken numunenin bileşenleri UV-VIS spektroskopisi ile tespit edilebilen bantlara ayrılmaya başlar. Bu nedenle, FPLC ve HPLC, iki tip sıvı kromatografi tekniğidir.
FPLC nedir?
FPLC, proteinler, nükleotidler ve pep titler gibi büyük biyomolekülleri saflaştıran bir tür sıvı kromatografisidir. Hızlı protein sıvı kromatografisi (FPLC) ilk olarak 1982 yılında İsveç'te Pharmacia şirketi tarafından geliştirilmiş ve pazarlanmıştır. Genellikle protein karışımlarını analiz etmek veya saflaştırmak için kullanılır. Bu, hareketli sıvı (hareketli faz) ve gözenekli bir katı malzeme (sabit faz) için örnek bileşenlerin afiniteleri ilkesine dayalı olarak gerçekleşir. FPLC'de hareketli faz bir tampondur ve sabit faz, boncuklardan oluşan bir reçinedir. Genellikle silindirik bir cam veya plastik kolona paketlenmiş çapraz bağlı agarozdan oluşur.
Şekil 01: FLPC (Hızlı Protein Sıvı Kromatografisi) Aparatı
FLPC stratejisinin çoğunda iyon değişim reçinesi kullanılır. Bu nedenle, ilgilenilen protein reçineye bir yük etkileşimi ile bağlanacaktır. FLPC tekniği ayrıca iki tampon kullanır: tampon 1 (çalışan tampon) ve tampon 2 (elüsyon tamponu). Başlangıçta, tampon ve numune karışımı kolondan geçerken, karışımdaki ilgili protein, bir şarj etkileşimi ile reçineye bağlanacaktır. Ancak ilgili protein ayrışır ve işlemin sonunda elüsyon tamponu kolondan geçtiğinde elüsyon tamponundaki solüsyona geri döner. Daha sonra çözelti (ilgilenen proteini içeren eluant), tuz konsantrasyonunu ve protein konsantrasyonunu ölçen iki detektörden geçer. Her protein ayrıştırıldığında, algılama sırasında bir "pik" olarak görünür ve daha sonraki kullanım için toplanabilir.
HPLC nedir?
HPLC, küçük moleküler ağırlıklı bileşikleri ayıran bir tür sıvı kromatografisidir. 1969'da ilk HPLC, ABD'de Waters Corporation tarafından ticari olarak üretildi. Yüksek performanslı sıvı kromatografisinde (HPLC), bir çözücü (mobil faz) içindeki bir numune karışımı (analit), yüksek basınçta kromatografik paketleme malzemesi (sabit faz) içeren bir kolondan pompalanır. Numune karışımı, helyum veya azottan oluşan hareketli bir taşıyıcı gaz akımı tarafından taşınır.
Şekil 02: HPLC (Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografisi)
Numune karışımındaki sabit faz ile en az etkileşime veya mobil faz ile en fazla etkileşime sahip bileşenler kolondan daha hızlı çıkacaktır. Öte yandan, numune karışımındaki sabit faz ile en fazla veya hareketli faz ile en az etkileşime sahip olan bileşenler kolondan daha yavaş çıkacaktır. Yukarıdaki etkileşim ilkesine dayanarak, numune karışımının bileşenleri ayrılabilir. Ayrıca, alet dedektörü, kolondan çıkan numune karışımının her bir bileşenini tanımlar. HPLC, ilaçlar, toksinler veya pestisitler gibi bilinen bileşiklerin varlığı veya yokluğu için çevresel ve biyolojik numuneleri incelemek için kullanılır. İlaç, çevre, adli tıp ve kimya gibi farklı sektörlerde kullanılmaktadır.
FPLC ve HPLC Arasındaki Benzerlikler Nelerdir?
- FPLC ve HPLC, sıvı kromatografi türleridir.
- Her ikisi de biyolojik örnekleri ayırmak ve tanımlamak için kullanılır.
- Sıvı bir hareketli faza ve katı bir sabit faza sahiptirler.
- Her iki teknik de örnekten geçmek için bir sütun kullanır.
- Bu teknikler, numune ayırma ve algılama için pompalar, dedektörler, valfler ve yazılımlar kullanır.
FPLC ve HPLC Arasındaki Fark Nedir?
FPLC, proteinler, nükleotidler ve pep titler gibi büyük biyomolekülleri saflaştırmak için kullanılan bir tür sıvı kromatografisidir. HPLC, küçük moleküler ağırlıklı bileşikleri ayırmak için kullanılan bir tür sıvı kromatografidir. Bu, FPLC ve HPLC arasındaki temel farktır. Ayrıca FPLC, pH ve iletkenlik monitörleri ile fraksiyon toplayıcıları kullanır. Buna karşılık, HPLC pH ve iletkenlik monitörleri ve fraksiyon toplayıcıları kullanmaz.
Aşağıdaki infografik, FPLC ve HPLC arasındaki daha fazla farkı tablo şeklinde listeler.
Özet – FPLC ve HPLC
Kromatografi, bileşenlerin bir karışımdan ayrılması için kullanılan bir laboratuvar analitik tekniğidir. Kolon kromatografisi, gaz kromatografisi, sıvı kromatografisi, iyon değişim kromatografisi vb. gibi çeşitli tiplere ayrılır. FPLC ve HPLC, iki tip sıvı kromatografi tekniğidir. FPLC, proteinler, nükleotidler ve pep titler gibi büyük biyomolekülleri saflaştırmak için kullanılan bir tür sıvı kromatografidir. Öte yandan, HPLC, küçük moleküler ağırlıklı bileşikleri ayırmak için kullanılan bir tür sıvı kromatografidir. Bu nedenle, FPLC ve HPLC arasındaki farkın özeti budur.
