HPLC ve hızlı HPLC arasındaki temel fark, HPLC için kullandığımız pompa basıncının 40 MPa civarındayken hızlı HPLC için pompa basıncının 3-5 MPa civarında olmasıdır.
Bir karışımın bileşenlerini ayırmak için kullandığımız en yaygın teknik “sıvı kromatografisidir”. HPLC'nin çok popüler olduğu bu amaca ulaşmak için birkaç teknik vardır. HPLC, bir sıvı karışımın bileşenlerini hızlı ve verimli bir şekilde tanımlayan, niceleyen ve ayıran Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografisi anlamına gelir. Fast HPLC, çözüm araştırmalarıyla ilgilenenlerin son zamanlarda dikkatini çeken özel bir HPLC uygulamasıdır.
HPLC nedir?
HPLC, yüksek performanslı sıvı kromatografisidir. Solventleri bir kolondan geçmeleri için itmek için yüksek bir basınç kullanır. Ayrıca amino asitler, nükleik asitler, karbonhidratlar, steroidler, antibiyotikler ve hidrokarbonlar gibi çeşitli bileşikleri ayırmak ve incelemek için ideal bir yoldur. HPLC, daha yüksek çözünürlük ve daha hızlı analiz gibi diğer karışım ayırma yöntemlerine göre birçok avantaja sahiptir. Yeniden paketleme ve rejenerasyon ihtiyacını ortadan kaldırır ve parametreler üzerinde daha iyi kontrol sağlar ve böylece ayırma verimliliğini arttırır. İdeal olarak, HPLC, çok küçük partikülleri ayırabildiğinden ve solventlerin kolayca akmasını kolaylaştıran yüksek basınçların kullanımına izin verdiğinden büyük ölçekli uygulamalar için uygundur.
Şekil 01: HPLC Sütunu
Kısaca HPLC tekniğinin çalışma yöntemi aşağıdaki gibidir. İlk olarak, bir pompa kullanarak numuneyi mobil faz akışına ayrı küçük miktarlarda tanıtmalıyız. Pompa basıncı 40 MPa'da tutulmalıdır. Bu mobil faz akışı, HPLC kolonundan süzülür. Daha sonra numunedeki bileşenler de kolondan geçer. Bununla birlikte, numune bileşenleri ile kolon içindeki adsorban arasındaki etkileşimlerdeki farklılık nedeniyle hareket hızları birbirinden farklıdır. Bu adsorbanı durağan faz olarak adlandırırız çünkü kolonun içinde bulunur (hareket etmez). Daha sonra kolonun sonunda kolondan ayrılan numuneyi toplayabiliriz, bu sayede numunedeki bileşenleri ayrı ayrı toplayabiliriz.
Hızlı HPLC nedir?
Son zamanlarda, Schering Plough araştırma enstitüsünde araştırmacı bilim adamları, bileşiklerin bir karışımdan daha da hızlı ayrılmasını sağlayan HPLC'nin gelişmiş bir versiyonu olan hızlı bir HPLC tekniği geliştirdiler. Ayrıca hızlı HPLC olarak bilinen bu teknik, katı bir silika partikülü üzerinde 0.5um gözenekli silikanın eritilmesiyle yapılan 2.7um kaynaşmış çekirdekli silika partiküllerini kullanır. Bu benzersiz şekilde yapılmış parçacıklar, ayırma prosedürünü çok hızlı ve HPLC'de kullandığımızdan daha düşük karşı basınçta yapar.
Şekil 02: FPLC Aparatı
Hızlı HPLC, UPLC ile karşılaştırılabilir sonuçlar alır, ancak bilim adamları, çok pahalı ultra yüksek basınçlı ekipman gerektirmediği için bu tekniğin üstün olduğunu düşünmektedir. Harika olan şey, hızlı HPLC'nin herhangi bir yeni laboratuvar protokolü gerektirmemesidir.
HPLC ve Hızlı HPLC Arasındaki Fark Nedir?
HPLC, yüksek performanslı sıvı kromatografisidir ve hızlı HPLC, yüksek performanslı sıvı kromatografisinin gelişmiş bir şeklidir. HPLC ve hızlı HPLC arasındaki temel fark, HPLC için kullandığımız pompa basıncının 40 MPa civarında olmasıdır. Oysa hızlı HPLC için pompa basıncı 3-5 MPa civarındadır. Ayrıca, HPLC tekniğini kullanarak amino asitler, nükleik asitler, karbonhidratlar, steroidler, antibiyotikler ve hidrokarbonlar gibi farklı bileşikleri ayırabiliriz, hızlı HPLC tekniği ise esas olarak proteinlerin ayrılması için kullanılır.
Aşağıdaki bilgi grafiği, HPLC ve hızlı HPLC arasındaki fark hakkında daha fazla bilgi sunar.
Özet – HPLC ve Hızlı HPLC
HPLC, tüm dünyada çok popüler hale gelen bir sıvı kromatografi tekniğidir. Fast HPLC, HPLC'nin yeni bir versiyonudur, Schering Plough Enstitüsü'ndeki araştırma bilim adamları bu yeni tekniği geliştirdiler. HPLC ve hızlı HPLC arasındaki temel fark, ayırma için kullandığımız pompa basıncında yatmaktadır. Yani; HPLC için kullandığımız pompa basıncı 40 MPa civarındadır. Ancak hızlı HPLC için pompa basıncı 3-5 MPa civarındadır.
