Ters faz ve normal faz HPLC arasındaki temel fark, ters faz HPLC'nin polar olmayan sabit faz ve polar mobil faz kullanması, normal faz HPLC'nin ise polar sabit faz ve daha az polar mobil faz kullanmasıdır.
Normal faz HPLC, Tswett'in bitki özlerini ayrıştırırken kullandığı en eski HPLC tekniğidir; cam bir sütunda tebeşir kullandı. Bu, “normal” teknik olarak adlandırılmasına yol açan klasik kromatografi moduydu. Ters fazlı HPLC ise bilim adamlarının son zamanlarda geliştirdiği normal tekniğin tam tersidir.
Ters Fazlı HPLC nedir?
Ters fazlı HPLC, hidrofobik sabit faz kullandığımız kromatografik bir tekniktir. Geniş uygulanabilirliği ve tekrarlanabilirliği nedeniyle tüm HPLC yöntemleri arasında bu yöntemi yaklaşık %70 oranında kullanıyoruz. Sabit faz polar değildir ve mobil faz polardır.
Çoğu zaman, bilim adamları mobil faz olarak asetonitril veya metanol gibi karışabilir, polar bir organik çözücü ile sulu bir su karışımı kullanır. Bu nedenle, analitler polar olmayan durağan faz ile etkileşime girer.
Normal Faz HPLC nedir?
Normal faz HPLC, hidrofilik sabit bir faz kullandığımız kromatografik bir tekniktir. Çok fazla kullanmasak da HPLC'nin geleneksel yöntemidir. Sabit faz polardır ve hareketli faz polar değildir. Daha da önemlisi, bu tekniğin mobil aşaması %100 organiktir. Bunun için su kullanılmadığı anlamına gelir.
Şekil 01: Analitteki bileşenlerin polaritesine göre normal faz ve ters faz HPLC kromatogramları için bir örnek profil.
Tipik olarak, durağan faz silika, siyano, diol, amino bağlı fazlar, vb. içerir. Mobil fazlar, heksan, etil asetat, vb. gibi organik çözücüleri içerir. Bu teknik, çözücü veya analit moleküllerinin yüzeyde tutulmasına dayanır. polar sabit faz.
Ters Faz ve Normal Faz HPLC Arasındaki Fark Nedir?
Ters fazlı HPLC, hidrofobik sabit faz kullandığımız kromatografik bir tekniktir. Bu tekniğin sabit fazı polar olmayan, hareketli faz ise polardır. Ayrıca, bilim adamları, ters fazlı HPLC'de mobil faz olarak asetonitril veya metanol gibi karışabilir, polar bir organik çözücü ile sulu bir su karışımı kullanır. Buna karşılık, normal faz HPLC, hidrofilik durağan bir faz kullandığımız kromatografik bir tekniktir. Bu tekniğin durağan fazı polar, hareketli fazı ise polar değildir. Buna ek olarak bilim adamları, normal faz HPLC'nin mobil fazı olarak hekzan, etil asetat vb. gibi organik çözücüler kullanırlar. Aşağıdaki infografik, ters faz ve normal faz HPLC arasındaki farkı tablo şeklinde sunar.
Özet – Ters Faz ve Normal Faz HPLC
Ters faz ve normal faz HPLC teknikleri, iki sıvı kromatografik tekniktir. Ters faz ve normal faz HPLC arasındaki temel fark, ters faz HPLC'nin polar olmayan bir sabit faz ve bir polar mobil faz kullanması, normal faz HPLC'nin ise bir polar sabit faz ve daha az polar mobil faz kullanmasıdır.
