HPLC ve UPLC arasındaki temel fark, HPLC'nin boyutları yaklaşık 5 mikrometre olan partiküllerin analizine izin verirken, UPLC'nin 2 mikrometre civarında çok daha küçük partiküllere izin vermesidir.
HPLC ve UPLC, bir bileşiğin bileşenlerini ayırmada yararlı olan Sıvı Kromatografik tekniklerdir. HPLC ve UPLC arasındaki farkı bilmek için önce HPLC'nin ne olduğunu bilmemiz gerekir. Bunun nedeni, UPLC'nin HPLC'nin özel bir versiyonu olması ve HPLC'nin ne olduğunu bilirsek bunu kolayca anlayabilmemizdir.
HPLC nedir?
HPLC terimi, Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografisi anlamına gelir. Bir bileşiğin farklı bileşenlerini ayırmak için kullanabileceğimiz bir tekniktir. Ayrıca, bir karışımın bileşenlerini tanımlamak, ölçmek ve ayırmak için en yaygın kullanılan tekniktir. Ayrıca bu teknik, çözücüleri kolondan geçirmek için yüksek bir basınç kullanır. Ayrıca, HPLC'nin başlıca uygulamaları, bir bileşiğin bileşenlerinin analizi için biyokimyadadır. Amino asitler, nükleik asitler, proteinler, hidrokarbonlar, pestisitler, karbonhidratlar, antibiyotikler, steroidler ve sayısız diğer inorganik maddelerin ayrılması ve tanımlanması için ideal bir yoldur.
Şekil 01: Bir Laboratuvarda HPLC Sistemi
Kısaca HPLC tekniğinin çalışma yöntemi aşağıdaki gibidir. İlk olarak, bir pompa kullanarak numuneyi mobil faz akımına ayrı küçük miktarlarda tanıtmalıyız. Pompa basıncı 40 MPa'da tutulmalıdır. Daha sonra, bu mobil faz akışı, HPLC kolonundan süzülür. Ayrıca numunedeki bileşenler kolondan geçer. Ancak hareket hızları birbirinden farklıdır. Bu fark, numune bileşenleri ile kolon içindeki adsorban arasındaki etkileşimlerdeki farklılıktan kaynaklanmaktadır. Bu adsorbanı sabit faz olarak adlandırırız çünkü kolonun içinde bulunur (hareket etmez). İkinci olarak, kolonun sonunda kolondan ayrılan numuneyi toplayabiliriz. Orada numunedeki her bir bileşen için tutma sürelerindeki farklılıkları belirleyebiliriz.
UPLC nedir?
UPLC terimi, Ultra Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografisi anlamına gelir. HPLC'nin bir varyasyonudur, ancak çalışma yöntemi aynıdır. Ancak, HPLC'den farklı olarak bu yöntem, 2 mikrometrelik küçük parçacıklar gibi çok küçük parçacıkların analiz edilmesine olanak tanır.
Şekil 02: Bir UPLC Cihazı
Ayrıca daha hızlı bir analiz sağlar. Bu teknikte, numunenin kolona yerleştirilmesi için 100 MPa'lık bir pompa basıncı kullanıyoruz. Bu nedenle, bu yüksek basınç, tüm numunenin kolona verildiğini doğrular. Bu nedenle, bu, HPLC'ye kıyasla çok verimlidir.
HPLC ve UPLC Arasındaki Fark Nedir?
HPLC terimi, Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografisi anlamına gelirken UPLC terimi, Ultra Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografisi anlamına gelir. Bu nedenle, UPLC tekniği, HPLC'nin geliştirilmiş bir versiyonudur. Bu nedenle, çalışma yöntemi her iki teknik için de aynıdır. Ancak UPLC, yüksek pompa basıncı kullandığı için HPLC'ye kıyasla daha verimlidir; HPLC için pompa basıncı 40 MPA iken UPLC için 100 MPa'dır. Bu nedenle, bu HPLC ve UPLC arasındaki bir farktır. Her şeyden önce, HPLC ve UPLC arasındaki temel fark, HPLC'nin boyutları yaklaşık 5 mikrometre olan partiküllerin analizine izin verirken, UPLC'nin 2 mikrometre civarında çok daha küçük partiküllere izin vermesidir.
Özet – HPLC ve UPLC
UPLC, HPLC'nin bir şeklidir. Bu nedenle, çalışma yöntemleri aynıdır. Ancak, HPLC'ye kıyasla UPLC'de bazı gelişmiş özellikler bulabiliriz. Bu nedenle, HPLC ve UPLC arasında bazı farklar vardır. Bununla birlikte, HPLC ve UPLC arasındaki temel fark, HPLC'nin boyutları yaklaşık 5 mikrometre olan partiküllerin analizine izin verirken, UPLC'nin 2 mikrometre civarında çok daha küçük partiküllere izin vermesidir.
