RP HPLC ve HIC arasındaki temel fark, RP HPLC'nin daha polar mobil faz ve daha az polar sabit faz kullanmasıdır. HIC ise hidrofobik moleküllerin kendisine bağlanmasına izin veren hidrofobik sabit bir faz kullanır.
Kromatografi, bir karışımı bileşenlerine ayırmaya yardımcı olan analitik bir tekniktir. İlk olarak, bir çözeltiye ayrılacak numuneyi çözmeliyiz. Bu çözelti-madde karışımına mobil faz denir. Daha sonra hareketli faz, durağan faz adı verilen başka bir malzemeden geçirilir. Sabit faz, bileşenlerin ayrılmasını belirler. Ayırma, malzemenin hareketli faz ile sabit faz arasında bölünmesi nedeniyle meydana gelir.
RP HPLC nedir?
RP HPLC terimi, Ters Fazlı Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografisi anlamına gelir. Bir karışımdaki bileşenlerin hidrofobikliğe göre ayrılmasını içerir. Hareketli fazdaki hidrofobik bileşenler, sabit fazdaki hareketsizleştirilmiş hidrofobik ligandlarla bağlantı kurarken, hidrofilik bileşenler, sabit fazın yüzeyine bağlanmadan durağan faz boyunca elute olur.
Şekil 01: HPLC Aparatı
Ayrıca, bu yöntem diğer kromatografik tekniklere göre daha fazla tekrarlanabilirliğe sahiptir ve aynı zamanda geniş uygulanabilirlik gösterir. Bu nedenle, bu yöntemi laboratuvarlarda tüm HPLC yöntemlerinin %75'inden fazlası için kullanıyoruz. Çoğu zaman, hareketli faz olarak karışabilir bir polar organik çözücü ile sulu bir su karışımı kullanırız. Böylece çözeltideki hidrofobik bileşenlerin durağan fazın yüzeyine tutunmasını sağlayacaktır.
HIC nedir?
HIC terimi, Hidrofobik Etkileşim Kromatografisi anlamına gelir. Bir tür ters fazlı HPLC'dir ve bu yöntem esas olarak proteinler gibi büyük biyomoleküllerin ayrılması için kullanılır. Bu yöntemde, biyomolekül örneğini yapmak için sulu bir ortam kullanmamız gerekir. Çünkü organik çözücüler proteinlerin denatüre olmasına neden olabilir. Ayrıca, bu teknik, sabit fazın hafif hidrofobik bir yüzeyi ile büyük moleküller arasındaki etkileşimi kullanır. Ayrıca, proteinin ambalaj üzerinde tutulmasını teşvik ettiği için numunede yüksek bir tuz konsantrasyonu kullanmak zorundayız; bu işleme tuzlama denir. Tuz konsantrasyonunu kademeli olarak az altarak, biyomoleküllerin hidrofobikliklerine göre ayrı ayrı elute olmasını sağlayabiliriz.
Genellikle, bu yöntem iyon değişim kromatografisinin tersi olan koşulları kullanır. Bu teknikte, numunedeki çözünen maddenin çözünmesini az altmak için önce kolondan bir tampon çözelti geçirmemiz gerekir. Proteinin hidrofobik bölgelerinin açığa çıkmasını sağlar. Bununla birlikte, molekül daha hidrofobik olduğunda, bağlanmayı desteklemek için daha az tuz gerekir. Burada önce daha az hidrofobik çözünenler ayrıştırılır ve tuz konsantrasyonundaki değişime göre en son daha fazla hidrofobik çözünenler ayrıştırılır.
RP HPLC ve HIC Arasındaki Fark Nedir?
Kromatografi, bir karışımdaki bileşenlerin ayrılması için analitik bir tekniktir. RP HPLC ve HIC, iki özel kromatografik tekniktir. RP HPLC ve HIC arasındaki temel fark, RP HPLC'nin daha polar mobil faz ve daha az polar sabit faz kullanması, HIC'nin ise hidrofobik moleküllerin ona bağlanmasına izin veren hidrofobik sabit faz kullanmasıdır.
Aşağıdaki infografik, RP HPLC ve HIC arasındaki farkı özetler.
Özet – RP HPLC ve HIC karşılaştırması
Kromatografi, bir karışımdaki bileşenlerin ayrılması için analitik bir tekniktir. RP HPLC ve HIC, iki özel kromatografik tekniktir. RP HPLC ve HIC arasındaki temel fark, RP HPLC'nin daha polar mobil faz ve daha az polar sabit faz kullanması, HIC ise hidrofobik moleküllerin kendisine bağlanmasına izin veren hidrofobik sabit faz kullanmasıdır.
