Anahtar Farkı – Klonlama ve Alt Klonlama
Klonlama ve Alt klonlama, ilgili DNA veya geni taşıyan genetik olarak özdeş hücreler veya organizmalar oluşturan moleküler biyolojik prosedürlerdir. Klonlama, ilgili genin veya DNA'nın bir vektöre yerleştirilmesini, bunun bir konak bakteri içinde replikasyonunu ve genetik yapının tam kopyaları olan hücre veya organizmaların üretilmesini içeren bir tekniktir. Alt klonlama, bir vektöre zaten yerleştirilmiş olan ilgili genin ikincil bir vektöre eklenmesini, bunun bir konak bakteri içinde çoğ altılmasını ve hücre veya organizmaların genetik olarak özdeş kopyalarının üretilmesini içeren bir tekniktir. Klonlama ve alt klonlama arasındaki temel fark, klonlamada ilgilenilen genin bir vektöre bağlandıktan sonra klonlama işlemine devam etmesi, alt klonlamada zaten klonlanmış ilgili genin ana vektörden ayrılıp tekrar içine eklenmesidir. bir alıcı vektörü ve işleme devam edin.
Klonlama Nedir?
Klonlama, genetik olarak özdeş organizmalar veya hücreler üreten prosedürdür. Doğada klonlama eşeysiz üreme yoluyla gerçekleşir. Genetik rekombinasyon veya değişiklik olmadığında, yavru hücreler ebeveynin aynı genetik yapısını alır. Prokaryotik ve ökaryotik organizmalar ikili bölünme, tomurcuklanma, mitoz, vb. ile klonlar oluştururlar. Moleküler biyolojide, genleri veya DNA'nın belirli parçalarını klonlamak, söz konusu DNA bölümünün yapısını ve işlevini incelemek için popüler bir yöntemdir.
Moleküler klonlamanın temel amacı, ilgilenilen DNA fragmanını (esas olarak genler) taşıyan genetik olarak özdeş hücrelerin veya organizmaların milyonlarca kopyasını yapmaktır. Bir diğerinin tam genetik kopyalarına sahip organizmalar yaratır. Öncelikle moleküler çalışmalarda yapısal ve fonksiyonel bilgi elde etmek ve DNA dizilimi için spesifik genler klonlanır. Ayrıca, belirli proteinlerin veya büyük ölçekli ürünlerin üretimi için klonlama yaygın olarak kullanılmaktadır.
Klonlama Prosedürü
Klonlama prosedürünün temel adımları aşağıdaki gibidir.
- İlgilenilen genin tanımlanması ve izolasyonu. (İlgilenilen genin PCR ile amplifikasyonu).
- İlgilenilen Genin Restriksiyon sindirimi (Restriksiyon endonükleaz geni keser).
- Vektör DNA'sının kısıtlama sindirimi. (Vektör DNA da aynı kısıtlama endonükleazı kullanılarak kesilir).
- Genin vektöre eklenmesi ve rekombinant molekülün oluşumu.
- Rekombinant vektörün bir konakçı bakteriye dönüştürülmesi.
- Transforme edilen bakterilerin izolasyonu ve tanımlanması (plazmit vektörü, transforme edilmiş bakterileri taramak için en yaygın olarak bir antibiyotik direnç geni olan seçilebilir bir gen içermelidir).
- Konak içinde rekombinant gen ifadesi.
Şekil_01: Klonlama Prosedürü
Alt Klonlama Nedir?
Alt klonlama, genin istenen işlevselliğini elde etmek için genin ifadesini görmek için ilgilenilen bir geni bir vektörden başka bir vektöre taşıma prosedürüdür. Bu yöntemde iki vektör söz konusudur; yani, ana vektör ve hedef vektör. Klonlanmış ekler, alt klonlamada tekrar ikinci bir vektöre taşınır. Geni birinci vektörden ikinci vektöre aktarmanın amacı, birinci vektörün yapamayacağı bir şeyi elde etmek veya zaten klonlanmış DNA parçası içindeki bir geni tekrar ayırıp tek başına ifade etmektir. Bu işlemde başlangıçta kısıtlama enzimleri kullanılır.
Alt Klonlama Prosedürü
Alt klonlamanın temel adımları aşağıdaki gibidir.
- Restriksiyon endonükleazlarının yardımıyla, ilgili DNA'nın donör plazmidinde (ana vektör) ayrılması.
- İlgilenilen DNA'nın PCR kullanılarak amplifikasyonu.
- PCR ürününün (ilgilenen DNA) jel elektroforezi ile saflaştırılması.
- Alıcı plazmitin, ana plazmitte ilgili DNA'yı ayırmak için kullanılan aynı kısıtlama endonükleazları tarafından açılması.
- Alt klonlanmış plazmidi oluşturmak için ilgili DNA'nın (gen) alıcı plazmide bağlanması.
- Alt klonlanmış vektörün yetkin bir konak bakteriye dönüştürülmesi.
- Dönüştürülmüş hücrelerin taranması.
- Plazmid DNA'nın saflaştırılması ve istenen ürünleri elde etmek için DNA dizilimi veya genlerin ekspresyonu için kullanılması.
Alt klonlama, klonlanmış gen grubundan bir genin izole edildiği durumlarda veya ilgili genin tam işlevini görmek için ilgili genin yararlı bir plazmide aktarılması gerektiğinde gerçekleştirilir.
Şekil_02: Alt Klonlama Prosedürü
Klonlama ve Alt Klonlama arasındaki fark nedir?
Klonlama ve Alt Klonlama |
|
| Klonlama, genetik olarak özdeş organizmalar veya hücreler üreten prosedürdür. | Alt klonlama, genin istenen işlevselliğini kazanmak için genin ifadesini görmek için ilgilenilen bir geni bir vektörden başka bir vektöre taşıma prosedürüdür. |
| Süreç | |
| İlgilenilen DNA'yı organizmadan ayırın ve bir vektöre bir kez ekleyin ve klonlayın | Zaten klonlanmış DNA, birinci vektörden ayrılır ve ikinci bir vektöre eklenir ve klonlanır. |
| Vektörlerle Hareket Ekle | |
| İlgilenen DNA'ları bir vektörden başka bir vektöre taşımaz. | Ekleri ana vektörden hedef vektöre taşıyın. |
Özet – Klonlama ve Alt Klonlama
Klonlama, eklenen gen veya ilgilenilen DNA ile genetik olarak özdeş hücreler veya organizmalar oluşturur. İlgili DNA'nın bir vektöre ayrılması ve eklenmesi ve bir konakçı bakteri içinde ekspresyon yoluyla ilerler. Alt klonlama, klonlama ile benzer adımları paylaşır. Ancak alt klonlamada, zaten klonlanmış DNA parçası (ilgilenen gen) bir vektöre eklenir ve bir konakçı bakteriye dönüştürülür. Klonlama ve alt klonlama arasındaki temel fark budur.
