Anahtar Fark – İmmünofloresan ve İmmünohistokimya
Moleküler biyolojik yöntemleri kullanan hastalık teşhisi, klinik laboratuvar teknolojisinin yükselen bir alanı haline geldi. Bir organizmada DNA, RNA veya eksprese edilmiş proteinleri analiz ederek bir hastalığı tanımlamak ve bir hastalığın nedenini anlamak için tüm testleri ve yöntemleri içerir. Moleküler teşhisteki hızlı gelişmeler, bulaşıcı ve bulaşıcı olmayan hastalıklar hakkında temel araştırmaları mümkün kılmıştır. Bunlar, hastalıkla ilgili önemli genlerde veya proteinlerde dizi veya ekspresyon seviyelerindeki değişiklikleri belirlemek için kullanılır. İmmünofloresan (IF) ve İmmünohistokimya (IHC), kanser biyolojisinde yaygın olarak kullanılan iki tekniktir. IF, monoklonal ve poliklonal antikorları analiz etmek için bir floresan algılama yönteminin kullanıldığı, IHC'nin ise monoklonal ve poliklonal antikorları saptamak için kimyasal bazlı yöntemler kullandığı bir IHC türüdür. IF ve IHC arasındaki temel fark budur.
İmmünofloresan (IF) nedir?
İmmünofloresan, tahlilde kullanılan antikorların tespit amacıyla floresan boyalar veya floresan proteinler kullanılarak etiketlendiği bir tespit tekniğidir. Etiketli ikincil antikorlar, istenmeyen arka plan sinyallerine neden olabilir; bu nedenle, IF tekniği, saptama sırasında istenmeyen sinyallerden kaçınmak için birincil antikorun kendisini şu anda etiketlemeye dayanır. Bu teknik sayesinde, birincil ve ikincil antikor arasındaki spesifik olmayan bağlanma önlenir ve ikincil bir inkübasyon aşaması olmadığından daha hızlıdır. Veri kalitesi de iyileştirildi.
Şekil 01: BrdU, NeuN ve GFAP için çift immünofloresan boyama
Florokromlar veya floresan boyalar radyasyonu, tercihen uyarılan ultraviyole radyasyonu emebilen bileşiklerdir. Parçacıklar uyarılmış halden temel duruma ulaştığında, bir spektrum oluşturmak için bir dedektör tarafından yakalanan ve tespit edilen radyasyon yayarlar. Floresan etiketin belirli reaksiyon için uyumlu ve stabil olması ve doğru sonuçların elde edilmesi için antikora uygun şekilde konjuge edilmesi büyük önem taşımaktadır. En çok kullanılan florokromlardan biri, yeşil renkli, absorpsiyon ve emisyon tepe dalga boyları sırasıyla 490 nm ve 520 nm olan floresan izotiyosiyanattır (FITC). IF'de kullanılan başka bir ajan olan rodamin kırmızı renktedir ve 553 nm ve 627 nm'lik belirgin absorpsiyon ve emisyon tepe dalga boylarına sahiptir.
İmmünhistokimya (IHC) nedir?
IHC, hedef hücrede antijenin varlığını belirlemek ve doğrulamak için uygulanan moleküler bir test yöntemidir. Hedef hücre, bulaşıcı bir parçacık, mikrobiyal bir patojen veya kötü huylu bir tümör hücresi olabilir. IHC, hedef hücrelerin hücre yüzeyinde bulunan antijenlerin varlığını belirlemek için monoklonal ve poliklonal antikorları kullanır. Teknik, antijen-antikor bağlanmasına dayanır. Belirli antijenin varlığını veya yokluğunu saptamak için bu antikorlara bir saptama markörü konjuge edilir. Bu belirteçler enzimler, floresan etiketli antikorlar veya radyo etiketli antikorlar gibi kimyasal belirteçler olabilir.
Şekil 02: İmmünohistokimya ile boyanmış fare-beyin dilimi
IHC'nin en popüler uygulaması, malign tümörlerin varlığını belirlemek için kanser hücresi biyolojisindedir, ancak aynı zamanda bulaşıcı hastalıkların tespiti için de kullanılır.
İmmünofloresan ve İmmünohistokimya Arasındaki Benzerlikler Nelerdir?
- İmmünofloresan ve İmmünohistokimya, in vitro koşullar altında gerçekleşir.
- Her iki teknik de antijen-antikora dayalıdır
- İkisi de çok hızlı tekniklerdir.
- Tekniklerin sonuçları tekrarlanabilir.
- İkisinin de veri kalitesi iyileştirildi.
- Kanser ve bulaşıcı hastalıkların teşhisinde kullanılan bu teknikler.
İmmünofloresan ve İmmünohistokimya Arasındaki Fark Nedir?
İmmünofloresan ve İmmünohistokimya |
|
| IF, tahlilde kullanılan antikorların tespit için floresan boyalar veya floresan proteinler kullanılarak etiketlendiği bir tespit tekniğidir. | IHC, tahlilde kullanılan antikorların tespit için kimyasallar veya radyoaktif elementler kullanılarak etiketlendiği bir tespit tekniğidir. |
| Doğruluk | |
| Doğruluk, IF tekniğinde IHC'ye kıyasla daha yüksektir. | IHC'de doğruluk daha düşüktür. |
| Özgüllük | |
| IF daha spesifiktir. | IHC daha az spesifiktir. |
Özet – İmmünofloresan ve İmmünohistokimya
Moleküler mekanizmalar, tıp alanında birçok değişikliği beraberinde getirmiş ve teşhis alanında devrimler getiren ileri moleküler test yöntemlerine yol açmıştır. Bu buluşlar, hastalığın hızlı ve doğru bir şekilde tanımlanmasına ve doğrulanmasına yol açarak, ilaçların başarılı bir şekilde uygulanmasına ve üretilmesine olanak sağlamıştır. Bu teknikler, ilaç metabolizması sırasında ilaçların hedeflerini bulmak ve ilacın farmakokinetik özelliklerini doğrulamak için farmakolojide de kullanılmaktadır. IF ve IHC, antijen ve antikor bağlama kavramına dayanan iki tanı yöntemidir, ancak her iki teknikte de saptama modu farklılık gösterir. IF, antijeni saptamak için floresan ilkesini kullanır ve IHC, antijeni saptamak için kimyasal konjugasyon kavramını kullanır. IF ve IHC arasındaki fark budur.
İmmünofloresan ve İmmünohistokimyanın PDF Versiyonunu İndir
Bu makalenin PDF sürümünü indirebilir ve alıntı notuna göre çevrimdışı amaçlarla kullanabilirsiniz. Lütfen PDF sürümünü buradan indirin İmmünofloresan ve İmmünohistokimya Arasındaki Fark.
