Doğrudan ve dolaylı immünofloresan arasındaki temel fark, doğrudan immünofloresan, ilgili hedefe karşı çalışan tek bir antikor kullanırken, dolaylı immünofloresan, ilgilenilen hedefi etiketlemek için iki antikor kullanır.
İmmünofloresan veya hücre görüntüleme, belirli bir hedef antijeni bir floroforla etiketlemek için kullanılan bir tekniktir. Burada florofor, ışık uyarımı üzerine ışığı yeniden yayan bir floresan kimyasal bileşiktir. Bir florofor hedef antijene bağlandığında, numunedeki hedef molekülün saptanmasını sağlar. Daha fazla tarif etmek gerekirse, bir antijen spesifik bir antikora bağlandığında, floroforlarla konjuge edilebilir. Bu nedenle, floresan mikroskobu altında gözlem yaparken numunedeki hedef antijenin varlığını tespit etmek kolaydır.
Ayrıca, iki tür immünofloresan vardır; doğrudan ve dolaylı immünofloresan. Doğrudan ve dolaylı immünofloresan arasındaki fark, esas olarak kullanılan antikorların sayısında ve florofor konjugasyonunda yatmaktadır. Yani, doğrudan immünofloresanda, florofor birincil antikora doğrudan konjuge olurken, dolaylı immünofloresanda florofor ikincil antikorla konjugattır.
Doğrudan İmmünofloresan nedir?
İmmünofloresan, spesifik hedef antijenleri tespit etmek için antikorları kullanır. Doğrudan immünofloresan, iki immünofloresan türünden biridir. Doğrudan immünofloresanda, tek bir antikor (birincil antikor) içerir ve florofor doğrudan birincil antikorla konjuge olur. Antikorun hedef antijen ile bağlanması üzerine, florofor, bir floresan mikroskobu ile tespit edilebilen floresan yayar.
Şekil 01: Doğrudan İmmünofloresan
Ancak, doğrudan immünofloresan, birincil konjuge antikorlar ikincil antikorlara kıyasla maliyetli olduğundan pahalı bir yöntemdir. Bununla birlikte, ek bir adım, dolayısıyla daha kısa bir teknik içermez. Ayrıca, doğrudan immünofloresanda spesifik olmayan bağlanmalar azalır. Bu nedenle türler arası çapraz reaktivite düşüktür. Ancak saptamada, doğrudan immünofloresansın duyarlılığı, dolaylı immünofloresanla karşılaştırıldığında zayıftır.
Dolaylı İmmünofloresan nedir?
Dolaylı immünofloresan, hedef antijenin etiketlenmesinde birincil ve ikincil antikorlar gibi iki tip antikor içeren immünofloresansın ikinci türüdür. Bu yöntemde, florofor ikincil antikorla birleşir. Bu nedenle, bu teknik ek bir adım içerir.
Şekil 02: İmmünofloresan
Ancak, birkaç florofor ikincil antikorlara konjuge edilebildiğinden ve algılamayı kolaylaştırdığından, bu yöntemde duyarlılık yüksektir. Ayrıca, dolaylı immünofloresan, ikincil antikorların konjugasyonunun daha ucuz ve daha kolay olması nedeniyle daha ucuzdur. Doğrudan immünofloresanla karşılaştırıldığında, dolaylı yöntemde türler arası çapraz reaktivite yüksektir.
Doğrudan ve Dolaylı İmmünofloresan Arasındaki Benzerlikler Nelerdir?
- İki tip immünofloresan tekniğidir.
- Birincil antikorlar ve florofor her iki yöntemde de yer alır.
- Ayrıca antijen-antikor reaksiyonu her iki yöntemde de gerçekleşir.
- Ayrıca, hem doğrudan hem de dolaylı immünofloresan, antijen tespiti için bir floresan mikroskobu kullanır.
Doğrudan ve Dolaylı İmmünofloresan Arasındaki Fark Nedir?
İmmünofloresan, kullanılan antikorlarla florofor konjugasyonuna bağlı olarak doğrudan veya dolaylı olabilir. Doğrudan immünofloresanda, florofor, bu teknikte yer alan tek antikor olan birincil antikor ile konjuge olur. Bunun aksine, dolaylı immünofloresanda, florofor, teknikte yer alan iki antikor türünden biri olan ikincil antikor ile konjuge olur. Bu nedenle, doğrudan ve dolaylı immünofloresan arasındaki temel fark, floroforla konjuge olan antikor türüdür.
Aşağıdaki infografik, doğrudan ve dolaylı immünofloresan arasındaki farkın yan yana karşılaştırmasını sağlar.
Özet – Doğrudan ve Dolaylı İmmünofloresan
İmmünofloresan, bir numunede spesifik antijenlerin varlığını tespit etmek için kullanılan bir tekniktir. Bu teknik spesifik antikorlar kullanır. Bu nedenle, bu durumda antikorlar, bir floresan mikroskobu kullanarak onları tespit etmek için floroforlarla birleşir. Ayrıca, doğrudan ve dolaylı immünofloresan olmak üzere iki tür immünofloresan vardır. Doğrudan immünofloresan, tek bir antikoru ve bu antikora doğrudan konjuge edilmiş floroforu içerir. Dolaylı immünofloresan iki antikor içerir; birincil ve ikincil ve ikincil antikora konjuge florofor. Birkaç ikincil antikor, bir birincil antikorla bağlanabildiğinden ve birkaç florofor ikincil antikorlarla konjuge olabildiğinden, dolaylı immünofloresan, doğrudan yöntemden daha hassas bir yöntemdir. Ayrıca, dolaylı yöntem, doğrudan yönteme göre daha ucuzdur. Bu nedenle, doğrudan ve dolaylı immünofloresan arasındaki fark budur.
