Elisa ve Elispot arasındaki temel fark, Elisa'nın salgılanan sinyal proteinlerinin toplam konsantrasyonunu belirleyen enzime bağlı bir immünosorbent testi olması, Elispot ise tek tek sitokin salgılayan hücreleri saptayan enzime bağlı bir immünosorbent testi olmasıdır.
Elisa ve Elispot, tıpta, bitki patolojisinde, biyoteknolojide ve farklı farmasötik endüstrilerinde yaygın olarak kullanılan iki enzime bağlı immünosorbent tahlilidir. Bu tekniklerde, bir protein analiti, ona karşı yönlendirilen bir antikor tarafından saptanır. Elisa, laboratuvarlarda kullanılan en popüler enzime bağlı immünosorbent testidir. Öte yandan Elispot, laboratuvarlarda Elisa yerine değil, Elisa'ya ek olarak kullanılan enzime bağlı bir immünosorban tahlilidir.
Elisa Testi Nedir?
Elisa, salgılanan sinyal proteinlerinin toplam konsantrasyonunu belirleyen enzime bağlı bir immünosorbent testidir. İlk olarak 1971'de Engvall ve Perlmann tarafından tanımlanan, yaygın olarak kullanılan bir analitik biyokimya tahlilidir. Bu teknik, bu spesifik proteine karşı yönlendirilen antikorlar kullanarak sıvı bir numunede belirli bir proteinin varlığını tespit etmek için katı faz tipi bir enzim immünoassay kullanır. Bu tahlil tıpta, bitki patolojisinde ve biyoteknolojide yaygın olarak kullanılan bir teşhis aracıdır.
ELISA Testinin Mekanizması
ELISA testinin çoğunda, başlangıçta katı bir destek (mikrolitre plaka) üzerine bilinmeyen miktarda antijen immobilize edilir. Daha sonra eşleşen birincil antikor, katı destek yüzeyi üzerine uygulanır. Bu antikor, antijenle (antijen-antikor kompleksi) bir kompleks oluşturur. Antijene bağlı birincil antikor, biyokonjugasyon yoluyla bir enzime bağlanan ikincil bir antikor tarafından tespit edilebilir. Elisa testinin son aşamasında enzimin substratını içeren bir madde eklenir. Bir birincil antikorun antijene uygun bir şekilde bağlanması varsa, substrat tarafından saptanabilir bir renk değişikliği üretilir. Sonuçta bu, numunedeki antijeni nicelendirir.
Şekil 01: Elisa'nın Farklı Türleri
Ayrıca, Elisa'ya doğrudan Elisa ve dolaylı Elisa gibi farklı yaklaşımlar vardır. Şu anda, Mycobacterium tuberculosis, rotavirüs, hepatit B virüsü, hepatit C virüsü, enterotoksin üreten E.coli, HIV ve SARS-CoV-2 gibi insan patojenlerini tespit etmek için çeşitli Elisa testleri kullanılmaktadır.
Elispot Testi Nedir?
Elispot, tek tek sitokin salgılayan hücreleri tespit eden enzime bağlı bir immünosorbent tahlilidir. Cecil Czerkinsky, ilk olarak 1983'te ELIspot'u tanımladı. Tek bir hücre için sitokin salgılama sıklığını nicel olarak ölçmeye odaklanan bir tahlil türüdür. Biyolojik veya kimyasal bir protein analitini tespit etmek için antikorları kullanan bir teknik olarak da sınıflandırılır. Florospot testi, birden fazla analiti (daha gizli proteinler) analiz etmek için floresan kullanan Elispot testinin bir varyasyonudur.
Elispot Testinin Mekanizması
Bu mekanizmada, ilk olarak mikrolitre plakaların kuyularına sitokine özgü monoklonal antikorlar eklenir. Daha sonra gözlenen istenen hücreler kuyucuklara eklenir. Daha sonra hücreler inkübe edilir. Hücre inkübasyonu sırasında, hücrelerin herhangi bir uyarana tepki vermesine ve sitokin salgılamasına izin verilir. Hücreler sitokin spesifik monoklonal antikorlarla çevrili olduğundan, inkübe edilen hücreler tarafından salgılanan sitokinler antikorlara bağlanacaktır.
Şekil 02: Elispot Testi
Bu sitokin spesifik monoklonal antikorları tespit etmek için kuyuya biyotinlenmiş spesifik tespit antikorları eklenir. Biyotinlenmiş spesifik saptama antikorları, kuyulardaki sitokine özgü monoklonal antikorları yakalar. Ayrıca, tespit antikorlarına bağlanmak için kuyulara streptavidin-enzim konjugatları eklenir. Son adımda, kuyulara spesifik substratlar eklenir. Enzim konjugatlarının ve substratların reaksiyonları, kuyularda belirgin noktalar oluşturur. Bu farklı noktalar, otomatik bir ELISPOT okuyucuda okunur. Sonuçta bu, sitokin salgılama sıklığını daha da hesaplayacaktır.
Elisa ve Elispot Arasındaki Benzerlikler Nelerdir?
- Her ikisi de enzime bağlı immünosorbent tahlilleridir.
- Her iki test de spesifik protein analitlerini tespit eder.
- Bu testler, protein analitlerini tanımlamak için spesifik antikorlar kullanır.
- Her iki test de enzimleri ve substratları kullanır.
- Tıp laboratuvarlarında teşhis aracı olarak kullanılırlar.
Elisa ve Elispot Arasındaki Fark Nedir?
Elisa, salgılanan sinyal proteinlerinin toplam konsantrasyonunu belirleyen enzime bağlı bir immünosorbent testidir. Öte yandan, Elispot, bireysel sitokin salgılayan hücreleri ölçen enzime bağlı bir immünosorban tahlilidir. İşte Elisa ve Elispot arasındaki temel fark budur. Ayrıca Elisa testinde antijen ilk olarak mikrolitrelik kuyucuklara immobilize edilir. Buna karşılık, Elispot testinde, antikor ilk olarak mikrolitrelik kuyucuklara immobilize edilir. Bu, Elisa ve Elispot arasındaki başka bir farktır.
Aşağıdaki infografik, Elisa ve Elispot arasındaki farkın ayrıntılı bir analizini tablo şeklinde sunar.
Özet – Elisa, Elispot'a Karşı
Elisa ve Elispot, tıpta, bitki patolojisinde, biyoteknolojide ve farklı farmasötik endüstrilerinde yaygın olarak kullanılan iki enzime bağlı immünosorbent tahlilidir. Elisa, ölçülecek liganda karşı yönlendirilen antikorları kullanarak sıvı bir numunede bir ligandın (protein) varlığını tespit eder. Elispot tahlili, bağışıklık tepkilerini izlemek için yaygın olarak kullanılan bir yöntemdir. Antikorlar kullanarak bireysel sitokin salgılayan hücreleri tespit eder. Hem immunoassay hem de bioassay tekniğidir. İşte Elisa ve Elispot arasındaki farkın özeti bu.
