Anahtar Farkı – Doğrudan ve Dolaylı ELISA
Enzim immünolojik testi olarak da bilinen enzim bağlantılı immünolojik test (ELISA), kandaki antikorları saptayan serolojik bir testtir. Hastanın belirli bir virüs tipine veya başka bir enfeksiyöz ajana (antijen) maruz kalıp kalmadığını ve vücudun enfeksiyona karşı antikor üretip üretmediğini öğrenmek için bir tanı aracı olarak kullanılır. ELISA, geçmiş ve mevcut enfeksiyonları da tanımlayabilir. Bu nedenle, ELISA genellikle doktorlar tarafından hastalıkların derinlemesine analizinden önce bir ön tarama testi olarak kullanılır. Bu test laboratuvar ortamında hastadan kan örneği alınarak yapılabilir. İki tür ELISA testi vardır: doğrudan ELISA ve dolaylı ELISA. Doğrudan ve dolaylı ELISA arasındaki temel fark, dolaylı ELISA'nın daha duyarlı olması ve ikincil bir antikor eklenmesini gerektirmesi, doğrudan ELISA'nın ise daha az duyarlı olması ve yalnızca bir birincil antikor kullanmasıdır.
Doğrudan ELISA nedir?
ELISA, kandaki belirli antijenlerin veya antikorların varlığını belirlemek için yapılan bir hastalık tanı testidir. Plaka tahlili olarak yapılır. Kolayca test edilen enzimlerle bağlantılı antikorları kullanır. Serum örneğindeki antijenlerin varlığı, enzimlerle bağlantılı spesifik antikorlarla bağlanır. Son adımda, enzimle reaksiyona girmesi için spesifik bir substrat eklenir. Enzim, substratı renkli veya sinyal üreten bir ürüne dönüştürür. Kimyasal substrattaki renk değişikliği, serum örneğinde belirli bir antikorun varlığını ortaya çıkarır. Doğrudan ELISA testi, yalnızca enzime bağlı bir birincil antikor kullanır. Antijene bağlandıktan sonra, kandaki enfeksiyöz ajanın varlığını gösteren rengi hızla değiştirir. Bununla birlikte, epitoplar antijenlerin bağlanmasıyla sınırlı olduğundan, sinyallerin yoğunluğu doğrudan ELISA'da daha zayıftır. Bu nedenle, doğrudan ELISA, dolaylı ELISA'ya kıyasla daha az duyarlıdır.
Şekil 01: Doğrudan ELISA Testi
Dolaylı ELISA nedir?
ELISA, iki tip antikor kullanılarak gerçekleştirilebilir; birincil antikor ve ikincil antikor. Dolaylı ELISA aracı, daha iyi tespit için sinyalleri yükseltmek için her iki antikor türünü de kullanır. Dolaylı ELISA tekniği aşağıdaki gibi yapılır.
- Plakalar antijenlerle inkübe edilir ve spesifik olmayan bağlanmayı engellemek için yıkanır.
- Ardından birincil antikorlar eklenir ve yıkanır.
- Enzime bağlı ikincil antikor eklenir ve yıkanır.
- Bir substrat eklenir ve enzimlerle reaksiyona girmesine izin verilir.
- Sinyaller tespit edilir ve numunedeki spesifik antijenin varlığı veya yokluğu belirlenir.
Dolaylı ELISA testinde, birkaç ikincil antikor, tek bir birincil antikora bağlanabilir. İkincil antikorlar, kolayca tahlil edilen enzimlerle bağlantılıdır. Bu nedenle, bir bağlanma, birden fazla etkileşim nedeniyle güçlü bir sinyal verebilir. Bu nedenle, dolaylı ELISA, doğrudan ELISA'dan daha duyarlıdır. Ancak dolaylı ELISA, ikincil antikorların çapraz reaksiyonları nedeniyle spesifik olmayan sinyaller verebilir.
Şekil 02: Dolaylı ELISA Testi
Doğrudan ve Dolaylı ELISA arasındaki fark nedir?
Doğrudan ve Dolaylı ELISA |
|
| Doğrudan ELISA, dolaylı ELISA'ya kıyasla daha az hassastır. | Dolaylı ELISA daha hassastır. |
| Alınan Zaman | |
| Doğrudan ELISA testi hızlı bir işlemdir. | Dolaylı ELISA zaman alıcıdır. |
| Antikor Kullanımı | |
| Doğrudan ELISA'da yalnızca bir tür antikor (Birincil antikorlar) kullanılır. | Birincil ve ikincil antikorlar dolaylı ELISA için kullanılır. |
| Enzimlerle Bağlantı | |
| Birincil antikorlar enzimlerle bağlantılıdır. | İkincil antikorlar enzimlerle bağlantılıdır. |
| İkinci Antikorların Çapraz Reaktivitesi | |
| Doğrudan ELISA, ikinci antikorların çapraz reaktivitesini ortadan kaldırır. | Dolaylı ELISA, ikinci antikorların çapraz reaktivitesinden etkilenir. |
| Sinyaller | |
| Sinyaller, dolaylı ELISA'ya kıyasla zayıf. | Sinyaller dolaylı ELISA'da güçlendirilir. Bu nedenle, tespit edilmesi kolaydır. |
Özet – Doğrudan ve Dolaylı ELISA
ELISA, bir hastanın kan örneğinde bir antikor veya antijenin varlığını tespit etmek için esas olarak immünolojide kullanılan biyokimyasal bir tekniktir. Doğrudan veya dolaylı ELISA olarak bilinen iki işlemle gerçekleştirilebilir. Doğrudan ELISA testi, antijeni saptamak için yalnızca birincil antikorları kullanırken, dolaylı ELISA hem birincil hem de ikincil antikorları kullanır. Doğrudan ELISA'da birincil antikorlar etiketlenirken dolaylı ELISA'da ikincil antikorlar etiketlenir. Bu, doğrudan ve dolaylı ELISA arasındaki farktır.
