Rekabetçi ve rekabetçi olmayan ELISA arasındaki temel fark, rekabetçi ELISA'nın bir inhibisyon antijeni kullanması ve rekabetçi olmayan ELISA'nın test için bir inhibisyon antijeni kullanmamasıdır.
Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA), antikorlar, antijenler, proteinler ve glikoproteinler gibi çeşitli hedefleri saptayan immünolojik bir testtir. Gerçekleştirmek için hızlı ve basit bir yöntemdir. Bu nedenle, daha sık araştırma ve teşhis amaçlı kullanılır. ELISA, enzimlerin kullanımını ve antikor ve antijenin spesifik bağlanmasını içerir. Reaksiyonların nasıl oluştuğuna bağlı olarak dört tip ELISA vardır: doğrudan ELISA, dolaylı ELISA, sandviç ELISA ve inhibisyon ELISA. Doğrudan, dolaylı ve sandviç ELISA, rekabetçi olmayan ELISA türleridir, inhibisyon ELISA ise bir tür tamamlayıcı ELISA'dır. Bu makalenin temel amacı, rekabetçi ve rekabetçi olmayan ELISA arasındaki farkı tartışmaktır.
Rekabetçi ELISA nedir?
Rekabetçi ELISA, sinyal girişiminin saptanması yoluyla bir numunedeki antijen konsantrasyonunu ölçer. Burada tahlil bir inhibitör antijeni kullanır. Bu nedenle, bir tür inhibisyon ELISA'dır. Bu prosedür sırasında, numunede bulunan antijenler, belirli bir miktarda etiketli antikora bağlanmak için seçilen referans antijen ile rekabet eder. Ayrıca, bu prosedür, fazla miktarda etiketlenmiş antikor ile numunenin inkübasyonu ile başlar. Ayrıca, referans antijen, çok kuyulu bir tahlil plakası üzerinde önceden kaplanmalıdır. Daha sonra numune karışımı, referans antijeni içeren tahlil plakasına eklenmelidir. Serbest antikorlar, numunedeki antijen miktarına bağlı olarak referans antijene bağlanacaktır. Bu nedenle, daha fazla numune antijeni mevcutsa, daha az referans antijen saptanacaktır. Böylece daha zayıf bir sinyal oluşturur.
Şekil 01: ELISA
Tersine, numune daha az antijen içerdiğinde, daha fazla referans antijen antikorları işgal edecek ve güçlü bir sinyal verecektir. Rekabetçi ELISA, numune düşük miktarda antijen içerdiğinde daha güçlü bir sinyal verdiğinden, rekabetçi ELISA, az sayıda antijen içeren numuneler için bile çok hassas bir testtir.
Bazı rekabetçi ELISA kitlerinde, etiketli bir antikor yerine etiketli bir antijen kullanılır. Burada, etiketli antijen ve numune antijeni, birincil antikora bağlanmak için rekabet edecektir. Benzer şekilde, numunedeki antijen miktarı düşük olduğunda, antikorlara bağlanan etiketli antijen miktarı daha yüksek olacak ve daha güçlü bir sinyal oluşturacaktır.
Rekabetçi Olmayan ELISA nedir?
Dört ELISA türü arasında, üç tür rekabetçi olmayan ELISA'dır. Bunlar doğrudan ELISA, dolaylı ELISA ve sandviç ELISA'dır. Her üç format da metodolojilerinde küçük farklılıklarla ortak ELISA ilkesi altında çalışır.
Doğrudan ELISA, enzim etiketli birincil antikor kullanır. Bu nedenle, ikincil bir antikor gerektirmez. Bu nedenle, doğrudan ELISA, diğer ELISA türlerinden daha hızlıdır. Birincil antikor, plakada bulunan hareketsizleştirilmiş hedef antijene doğrudan bağlanacaktır. Bu nedenle, enzim-substrat reaksiyonu gerçekleşir ve görünür bir sinyal üretilir.
Şekil 02: Sandviç ELISA
Doğrudan ELISA'nın aksine, dolaylı ELISA, etiketlenmemiş bir birincil antikor ve bir enzim etiketli ikincil antikor kullanır. Birincil antikor, hareketsizleştirilmiş antijene bağlandığında, ikincil antikor, birincil antikora bağlanır. İkincil antikordaki enzim, antijen ile reaksiyona girecek ve görünür bir sinyal üretecektir. Sandviç ELISA, hem doğrudan hem de dolaylı ELISA'dan farklıdır. Burada antikor, tahlil plakasının duvarına sabitlenir.
Rekabetçi ve Rekabetçi Olmayan ELISA Arasındaki Benzerlikler Nelerdir?
- Rekabetçi ve rekabetçi olmayan ELISA, iki tip immünosorbent tahlil tekniğidir.
- Son derece esnek ve hassas tekniklerdir.
- Ayrıca, hem rekabetçi hem de rekabetçi olmayan ELISA, enzime bağlı immünoanalizlerdir.
- Ayrıca, her iki yöntem de bir enzim-substrat reaksiyonu nedeniyle bir sinyal üretir.
Rekabetçi ve Rekabetçi Olmayan ELISA Arasındaki Fark Nedir?
Rekabetçi ELISA, sınırlı miktarda spesifik antikor için analit antijen ile etiketli antijen arasındaki tamamlanmaya dayanan bir ELISA türüdür. Öte yandan, rekabetçi olmayan ELISA'da ilgili antijen ile referans antijen arasında böyle bir rekabet yoktur. Bu nedenle, rekabetçi ve rekabetçi olmayan ELISA arasındaki temel fark budur. Benzer şekilde, rekabetçi ELISA bir inhibisyon ELISA'sıdır, rekabetçi olmayan ELISA ise bir inhibisyon ELISA değildir. Dolayısıyla bu aynı zamanda rekabetçi ve rekabetçi olmayan ELISA arasındaki farktır.
Ayrıca, rekabetçi ELISA, düşük miktarda ilgili antijeni ölçmek için daha uygundur. Duyarlı bir yöntemdir. Öte yandan, rekabetçi olmayan ELISA, bir numunede bulunan antijenlerin sayısına bağlı değildir. Bu nedenle, bu aynı zamanda rekabetçi ve rekabetçi olmayan ELISA arasındaki farktır.
Aşağıdaki infografik, rekabetçi ve rekabetçi olmayan ELISA arasındaki farkı karşılaştırmalı olarak açıklıyor.
Özet – Rekabetçi ve Rekabetçi Olmayan ELISA
Rekabetçi ve rekabetçi olmayan ELISA, ELISA'nın veya enzime bağlı immünosorbent tahlillerinin iki ana türüdür. Rekabetçi ve rekabetçi olmayan ELISA arasındaki farkı özetlerken, rekabetçi ELISA, ilgili antijen ile referans antijen arasındaki sınırlı miktarda antikora yönelik rekabete dayanır. Bu nedenle rekabetçi ELISA, inhibisyon ELISA olarak da adlandırılır. Öte yandan, rekabetçi olmayan ELISA, hedef antijenler ve referans antijenler arasındaki rekabete dayanmaz. İlgili analite karşı aşırı miktarda etiketli spesifik antikor kullanır. Bu nedenle, rekabetçi ve rekabetçi olmayan ELISA arasındaki temel fark budur. Doğrudan ELISA, dolaylı ELISA ve sandviç ELISA, rekabetçi olmayan ELISA'nın üç ana türüdür.
