Anahtar Farkı – HPLC ve HPTLC
HPLC ve HPTLC arasındaki temel fark, HPLC'nin bir numunedeki bileşenlerin nicel olarak ayrılmasına izin verirken, HPTLC'nin bir numunedeki bileşenlerin nicel olarak ayrılmasına izin vermemesidir.
Kromatografi, bir karışımdaki bileşenleri ayırmak ve tanımlamak için kullanılan fiziksel bir ayırma yöntemidir. Hem HPLC hem de HPTLC, kromatografik tekniklerdir. HPLC, yüksek performanslı sıvı kromatografisidir. HPTLC, yüksek performanslı ince tabaka kromatografisidir.
HPLC nedir?
HPLC, yüksek performanslı sıvı kromatografisidir. Bir karışımdaki bileşenleri ayırmak, tanımlamak ve ölçmek için kullanılan analitik bir tekniktir. Bu teknikte numune uygun bir çözücü içinde çözülür. Daha sonra numuneli çözücü belirli bir basınçta bir pompadan geçirilir. Pompa katı adsorban malzeme ile doldurulur. Daha sonra bazı bileşenler emici malzemeye güçlü bir şekilde bağlanırken, diğer bileşenler gevşek bir şekilde bağlanır. Bu, bileşenlerin pompa boyunca farklı akış hızlarına sahip olmasına neden olur. Bu nedenle bileşenler kolayca ayrılabilir.
Şekil 01: Bir HPLC Sistemi
Pompayı dolduran adsorban malzeme sabit faz olarak bilinir. Çözünmüş numune ile çözücü, mobil faz olarak bilinir. Bu teknikte kullanılan pompaya kolon denir. Kolon, en yaygın olarak silika parçacıkları olan bir adsorban malzeme ile doldurulur. Bu parçacıkların boyutu 2-50 um arasında değişebilir. Ayırma işlemi, mobil fazın bileşiminden ve sistemin sıcaklığından etkilenir. Durağan faz ile numunedeki bileşen arasındaki etkileşimler hidrofobik etkileşimler, dipol-dipol etkileşimleri, iyonik bağ vb. olabilir.
HPLC'nin çalışma basıncı, geleneksel sıvı kromatografisinden oldukça yüksektir. 50-350 bar civarındadır. Sıvı kromatografisi ve HPLC arasındaki fark, sıvı kromatografisinde numunenin yerçekimi altında kolondan düşmesi, HPLC'de numunenin kolondan basınçlandırılmasıdır. Kolonun ve emici partiküllerin boyutu da geleneksel sıvı kromatografisi ile karşılaştırıldığında çok küçüktür. Ancak HPLC tekniğinin verdiği çözünürlük daha üstündür.
HPTLC nedir?
HPTLC, yüksek performanslı ince tabaka kromatografisidir. Geleneksel TLC'nin gelişmiş ve otomatikleştirilmiş şeklidir. Bu teknik, kısa sürede verimli bir çözüm sağlar. Bu analiz yönteminde, numune ve bir referans aynı anda analiz edilebilir, bu da numunenin referans ile karşılaştırılmasına olanak tanır. Diğer kromatografik tekniklerden daha gelişmiş bir analitik doğruluk sağlar. Analiz için geçen süre daha azdır. Teknik, düşük maliyetli bir tekniktir.
Şekil 02: HPTLC Kullanan Gıda Boyalarının Analizi
HPTLC yöntemi basit bir işlemdir ve numune hazırlama adımı da ortadan kalkar (Geleneksel TLC'de numune hazırlama adımı ayırmadan önce dahil edilir. Bu adım temizleme ve zenginleştirmeyi içerir). Diğer kromatografik teknikler gaz giderme, filtrasyon, vb. gibi ön işlemler gerektirse de solvent herhangi bir ön işlem olmaksızın doğrudan kullanılabilir.
HPTLC'de kullanılan adsorban malzeme, çok küçük partikül boyutlarına sahip silikadır. Geleneksel TLC'de silikanın partikül boyutu 5-20 μm iken HPTLC'de 4-8 μm'dir. Örnek, bir aplikatör kullanılarak HPTLC plakasına uygulanır. Üniform ve güvenli bir uygulama sağlar. Daha sonra plakalar, hareketli faza sahip bir bölmeye yerleştirilir. Oda, mobil fazın buharıyla doyurulmalıdır. HPTLC işleminden sonra hareket eden noktalar tespit edilebilir. HPTLC tekniği, plaka üzerindeki lekeleri tespit ederken uygun bir UV bölgesi veya bir iyot odası kullanır.
HPLC ve HPTLC Arasındaki Fark Nedir?
HPLC ve HPTLC |
|
| HPLC, yüksek performanslı sıvı kromatografisidir. | HPTLC, yüksek performanslı ince tabaka kromatografisidir. |
| Teknik | |
| HPLC'de solventli mobil faz, sabit fazla dolu bir kolondan geçirilir. | HPTLC'de, numune bir TLC plakası üzerinde lekelenir ve mobil fazı içeren bir bölmenin içine yerleştirilir; daha sonra numunenin hareketli faz ile birlikte plakadan yukarı doğru hareket etmesine izin verilir. |
| Ölçüm | |
| HPLC'de, kolon boyunca bileşenlerin akış hızları arasındaki farklar, numunedeki bileşenleri ayırmak için kullanılır. | HPTLC'de, numunedeki her bir bileşenin kat ettiği mesafeler arasındaki farklar, numunedeki bileşenleri ayırmak için kullanılır. |
| Niceliksel Ayırma | |
| HPLC, bir numunedeki bileşenlerin nicel olarak ayrılmasını sağlar. | HPTLC, bir numunedeki bileşenlerin nicel olarak ayrılmasına izin vermez. |
Özet – HPLC ve HPTLC
HPLC ve HPTLC iki kromatografik tekniktir. HPLC ve HPTLC arasındaki temel fark, HPLC'nin bir numunedeki bileşenlerin nicel olarak ayrılmasına izin verirken, HPTLC'nin bir numunedeki bileşenlerin nicel olarak ayrılmasına izin vermemesidir.
