Anahtar Farkı – RNASE A ve RNASE H
Ribonükleazlar, RNA'yı spesifik olarak daha küçük birimlere indirgeyen nükleazlardır. İki kategoriye ayrılabilirler; endoribonükleazlar ve eksoribonükleazlar. Endoribonükleaz, tek sarmallı veya çift sarmallı RNA'yı parçalayabilen bir endonükleazdır. Bir RNA polinükleotit zinciri içindeki fosfodiester bağlarını parçalar. Örnekler RNase A, RNase III, RNase T1, RNase P ve RNase H'dir. Eksoribonükleaz, RNA molekülünün 5'ucu veya 3'ucundan terminal nükleo titleri çıkararak RNA'yı parçalayan bir eksonükleazdır. Örnekler RNase R, RNase II, RNase D ve RNase PH'dir. RNASE A ve RNASE H arasındaki temel fark, RNase A'nın tek sarmallı RNA'yı spesifik olarak daha küçük bileşenlere indirgeyen bir pankreatik ribonükleaz olmasıdır; hidrolitik mekanizma.
RNASE A nedir?
RNaz A, tek sarmallı RNA'nın 3' ucundaki eşleşmemiş sitozin ve urasil kalıntılarını spesifik olarak ayıran bir pankreatik ribonükleazdır. RNase H, daha yüksek bir tuz konsantrasyonunda (0.3M veya daha yüksek NaCl konsantrasyonu) çalışır. Hidrolitik reaksiyon iki adımdır. 2', 3' siklik monofosfat ara ürünü aracılığıyla 3' fosforile edilmiş bir ürün oluşturur. Daha yüksek tuz konsantrasyonunda tek sarmallı RNA'ya özgü olmasına rağmen, daha düşük NaCl konsantrasyonunda (0,3M NaCl'den daha düşük) RNA-DNA hibritinde çift sarmallı RNA ve RNA'yı da bozabilir.
Bruce Merrifield ilk önce bu enzimi sentezledi. RNase A, moleküler araştırmalarda çok popüler bir enzimdir. Sığır pankreası RNase A, RNase A'nın bir örneğidir. Laboratuvarda kullanılan en dayanıklı enzimlerden biridir. Bu enzimin aktivitesi için bir kofaktöre ihtiyacı yoktur. Son derece termostabil bir enzimdir. RNaz A, doğru bir amino asit dizisinin tespit edildiği ilk enzim ve üçüncü proteindir. Bu enzim 124 amino asit ve 12600da moleküler kütle ile çok küçüktür. Ve dört Histidin kalıntısına sahiptir (His 12 ve His 119, katalitik reaksiyona girer).
Şekil 01: RNase A
RNaz A, ham bir numune kaynatılarak izole edilebilir. Kaynadığında, diğer tüm enzimler kalan RNase A'yı bozar. RNase A şaşırtıcı derecede stabil bir enzimdir. Bu enzim ribonükleaz inhibitörü protein, ağır metal ve üridin vanadat kompleksleri ile inhibe eder.
RNase H nedir?
RNase H, hidrolitik reaksiyon yoluyla RNA-DNA hibridindeki RNA'yı parçalayabilen spesifik olmayan bir ribonükleaz enzimidir. RNase H, bir RNA-DNA hibridinde RNA'nın 3'- O-P bağını parçalar. Sonuçta 3'OH ve 5' fosfat sonlu ürünler üretir. DNA replikasyonunda, yeni DNA zincirleri oluşturulduktan sonra RNA primerini çıkararak çok önemli bir rol oynar. Laboratuvar koşullarında, RNA-DNA hibridindeki RNA'yı spesifik olarak bozar, ancak DNA ve hibritlenmemiş RNA'yı bozmaz. Ve bu enzim genellikle cDNA sentezi sırasında ilk tamamlayıcı DNA zinciri oluşturulduktan sonra RNA şablonunu yok etmek için kullanılır.
Şekil 02: RNase H
RNase H ayrıca nükleaz koruma deneylerinde de kullanılır. Ayrıca mRNA'dan poli A kuyruğunun çıkarılmasına dahil edilebilir. RNase H, hücrenin içindeki ve dışındaki kodlamayan RNA'yı yok etme yeteneğine sahiptir. Metal iyonları, bu protein aktivitesi için kofaktörler olarak gereklidir. RNase H enzimini inhibe etmek için bir şelatör (EDTA) kullanılabilir.
RNASE A ve RNASE H Arasındaki Benzerlikler Nelerdir?
- Her ikisi de doğada proteindir.
- İkisi de endoribonükleazdır
- Her ikisi de RNA'yı bozabilir.
- Her ikisi de hidrolitik reaksiyonlar gerçekleştirir.
- Moleküler laboratuvarlar her ikisini de kullanır.
RNASE A ve RNASE H Arasındaki Fark Nedir?
RNASE A vs RNASE H |
|
| RNaz A, daha yüksek tuz konsantrasyonunda tek sarmallı RNA'nın eşleşmemiş sitozin ve urasil kalıntılarının 3' ucunu spesifik olarak ayıran bir pankreatik ribonükleazdır. | RNase H, hidrolitik reaksiyon yoluyla RNA-DNA hibridindeki RNA'yı parçalayabilen spesifik olmayan bir ribonükleaz enzimidir. |
| RNA Parçalamanın Doğası | |
| RNaz A, daha yüksek tuz konsantrasyonunda özellikle tek iplikli RNA'yı parçalar. | RNase H, RNA-DNA hibridinde RNA'yı parçalar. |
| Etkinlik için Eş-faktör İhtiyacı | |
| RNase A aktivitesi için kofaktörlere ihtiyaç duymaz. | RNase H, aktivitesi için kofaktör olarak metal iyonlarına ihtiyaç duyar. |
| Protein Aktivitesinin İnhibitörleri | |
| Ribonükleaz inhibitörü protein, ağır metal ve üridin vanadat kompleksleri, RNAse A aktivitesini inhibe eder. | Bir şelatör (EDTA), RNase H aktivitesini inhibe eder. |
| DNA Replikasyonunda RNA Primer Kaldırma | |
| RNase A, DNA replikasyonunda RNA primerinin çıkarılması için kullanılmaz. | RNase H, DNA replikasyonunda RNA primerinin çıkarılması için kullanılır |
| Tamamlayıcı DNA (C-DNA) Sentezinde DNA Şablonunun Kaldırılması | |
| RNase A, tamamlayıcı DNA (C-DNA) sentezi sırasında RNA şablonunun çıkarılması için kullanılmaz. | RNase H, tamamlayıcı DNA (C-DNA) sentezi sırasında RNA şablonunun çıkarılması için kullanılır. |
| Oligo'ya Hibritlenmiş mRNA'da Poli-A-Kuyruğunun Kaldırılması (dt) | |
| RNaz A, oligo'ya (dt) hibridize edilmiş mRNA'daki "poli-A kuyruğunu" çıkarmak için kullanılmaz. | RNase H, oligo (dt)'ye hibritlenmiş mRNA'daki "poli-A kuyruğunu" çıkarmak için kullanılır |
Özet – RNASE A ve RNASE H
Ribonükleazlar, RNA'yı daha küçük birimlere ayırma yeteneğine sahip nükleaz enzimleridir. Onlar iki tiptir; endoribonükleazlar ve eksoribonükleazlar. Endoribonükleaz, tek sarmallı veya çift sarmallı RNA'yı parçalama yeteneğine sahip bir endonükleazdır. Ve bir RNA polinükleotid zinciri içindeki fosfodiester bağını parçalar. RNase A ve RNase H iki endoribonükleazdır. RNase A, daha yüksek tuz konsantrasyonunda tek iplikli RNA'nın 3' ucundaki eşleşmemiş sitozin ve urasil kalıntılarını spesifik olarak ayıran bir pankreatik ribonükleazdır. RNase H, hidrolitik reaksiyon yoluyla RNA-DNA hibridindeki RNA'yı parçalayabilen spesifik olmayan bir ribonükleaz enzimidir. Bu, RNase A ve RNase H arasındaki farktır.
PDF'yi indirin RNASE A ve RNASE H
Bu makalenin PDF sürümünü indirebilir ve alıntı notuna göre çevrimdışı amaçlarla kullanabilirsiniz. Lütfen PDF sürümünü buradan indirin RNASE A ve RNASE H Arasındaki Fark
