İmmünopresipitasyon ve birlikte immünopresipitasyon arasındaki temel fark, immünopresipitasyonun belirli bir antikor kullanarak solüsyondan bir proteini çökelten bir teknik olması, koimmunopresipitasyonun ise spesifik bir antikor kullanarak intakt protein komplekslerini solüsyondan çökelten bir teknik olmasıdır.
Antijen-antikor etkileşimi, bir bağışıklık reaksiyonu sırasında B hücreleri ve antijenler (proteinler) tarafından üretilen antikorlar arasındaki spesifik kimyasal etkileşimdir. Normal olarak, çözünür antijenler, çözünür olmayan bir görünür kompleks oluşturmak için çözünür sıcaklık ve pH'da bir elektrolit varlığında çözünür antikorlarla birleşir. Buna çökelme reaksiyonu denir. Bu nedenle, immünopresipitasyon ve koimmunopresipitasyon, antijenler gibi proteinleri tanımlamak için laboratuvarlarda rutin olarak kullanılan iki tip çökelme reaksiyonudur.
İmmünopresipitasyon nedir?
İmmünopresipitasyon, spesifik bir antikor kullanarak bir çözeltiden bir proteini çökeltme tekniğidir. Bazen bu teknik, bireysel protein immünopresipitasyon olarak da bilinir. İmmünopresipitasyon, ilgili seçilmiş bir proteini hücre lizatından izole etmek için bir antikor kullanır. Antikor, spesifik hedef proteinini veya antijenini bir karışımdan arındırır. Antikor proteine bağlanır ve antikor-antijen kompleksi numuneden çekilir. Deney düzeneğinde, antijen-antikor kompleksi, protein A/G bağlı agaroz veya manyetik boncuklar kullanılarak çıkarılır. Daha sonra boncuklar yıkanır ve ilgili protein ayrıştırılır. İmmünopresipitasyon ile elde edilen saflaştırılmış protein veya antijen, enzim bağlantılı immünosorbent deneyi (ELISA) ve western blot (WB) gibi çeşitli tekniklerle doğrulanır.
Şekil 01: İmmünopresipitasyon
Ayrıca, izole edilmiş proteinler veya antijenler, birincil diziye dayalı enzimatik sindirim modelleri kullanılarak kütle spektrometrisi yoluyla ölçülebilir ve tanımlanabilir. Bir immünopresipitasyon deneyine başlamadan önce bazı hususlar vardır: yöntem formatı seçimi, proteinleri ve boncukları bağlama, doğru birincil antikor ve izotipi seçme ve negatif kontrol.
Koimmunopresipitasyon nedir?
Koimmünopresipitasyon, spesifik bir antikor kullanarak çözeltiden bozulmamış protein komplekslerini çökeltme tekniğidir. Koimmünopresipitasyon genellikle, daha büyük bir protein kompleksinin üyesi olduğuna inanılan bilinen bir proteini (antijen) hedef alan spesifik bir antikor seçerek çalışır. Bilinen üyeyi spesifik bir antikorla hedefleyerek, tüm protein kompleksini çözeltiden çıkarmak mümkündür. Bu, kompleksin bilinmeyen üyelerinin tanımlanmasını sağlar. Protein komplekslerini çözeltiden çekme kavramına bazen "aşağı çekme" mekanizması denir.
Şekil 02: B Koimmunopresipitasyon
Koimmünopresipitasyon, protein-protein etkileşimlerini analiz etmek için kullanılan güçlü bir tekniktir. Koimmünopresipitasyonun temel amacı, ilgili proteine ligandlar, kofaktörler veya sinyal molekülleri gibi etkileşime giren ortakların tanımlanmasıdır. Ayrıca, birlikte immünopresipitasyon, proteinleri serumdan, hücre lizatından, homojenize dokudan veya şartlandırılmış ortamdan ayırmak için kullanılan etkili bir tekniktir.
İmmünopresipitasyon ve Koimmunopresipitasyon Arasındaki Benzerlikler Nelerdir?
- İmmünopresipitasyon ve koimmunopresipitasyon, çökeltme reaksiyonuna dayalı tekniklerin iki türüdür.
- Her iki teknik de belirli bir antikor aracılığıyla hedef antijeni tanımlamak için kullanılabilir.
- Her iki teknik de büyük ölçüde antijen-antikor etkileşimine bağlıdır.
- Klinik laboratuvarlarda rutin olarak kullanılırlar.
İmmünopresipitasyon ve Koimmunopresipitasyon Arasındaki Fark Nedir?
İmmünopresipitasyon, spesifik bir antikor kullanarak solüsyondan bir proteini çökelten bir teknikken, koimmunopresipitasyon, spesifik bir antikor kullanarak intakt protein komplekslerini solüsyondan çökelten bir tekniktir. Bu nedenle, immünopresipitasyon ve koimmunopresipitasyon arasındaki temel fark budur. Ayrıca, immünopresipitasyon laboratuvarlarda daha yaygın olarak kullanılırken, koimmunopresipitasyon laboratuvarlarda yaygın olarak kullanılmaz.
Aşağıdaki infografik, yan yana karşılaştırma için immünopresipitasyon ve koimmunopresipitasyon arasındaki farkları tablo şeklinde sunar.
Özet – İmmünopresipitasyon ve Koimmunopresipitasyon
İmmünopresipitasyon ve koimmunopresipitasyon, antijen-antikor etkileşimine bağlı olan iki tip çökelme reaksiyonuna dayalı tekniktir. İmmünopresipitasyon tekniği, spesifik bir antikor kullanarak solüsyondan bir proteini çökeltirken, koimmunopresipitasyon tekniği, spesifik bir antikor kullanarak intakt protein komplekslerini solüsyondan çöktürür. Bu, immünopresipitasyon ve koimmunopresipitasyon arasındaki farkı özetler.
