Dönüşüm ve Transfection
Dönüşüm ve transfeksiyon, yabancı bir geni bir konak hücreye sokmak için kullanılan iki basit tekniktir. Ancak bu teknikler, ana bilgisayar veya vektör sistemlerinin türüne bağlıdır.
Hücre Dönüşümü Nedir?
Dönüşüm, genleri maya ve bakteri hücrelerine sokmak için kullanılan tekniktir. Bu teknik genellikle genlerde kalıtsal değişikliklere neden olur ve bu nedenle genin ifadesi kalıcıdır. Bakteriyel transformasyon ilk olarak 1928'de Frederick Griffith tarafından tanıtıldı. Daha sonra 1970'lerin başında, bu teknik E.koli. E. coli'nin transformasyon işlemi sırasında, hücreler buz gibi soğuk CaCl2 çözeltisine batırılır Bu adım, E.coli hücrelerini yetkin kılar. Bundan sonra, yetkin hücreler plazmit DNA ile karıştırılır ve 20-30 dakika buz üzerinde inkübe edilir. Daha sonra DNA'nın hücre içine transferini sağlamak için kısa bir ısı şoku verilir. Son olarak, hücreler bir besin suyuna yerleştirilir ve plazmitleri oluşturmak için 37 °C'de 60-90 dakika inkübe edilir. Bu adımlar başarıyla tamamlandıktan sonra dönüştürülmüş hücreler, hücrelerin çoğ altılması için uygun bir ortam üzerine yerleştirilebilir. Dönüşüm verimsiz bir teknik olarak kabul edildiğinden klon bankalarının hazırlanmasında kullanılamaz.
Hücre Transfeksiyon Nedir?
Transfeksiyon, yabancı bir genin genellikle memeli hücrelerine sokulmasına yönelik bir yöntemdir. İki transfeksiyon yöntemi vardır; yani, geçici transfeksiyon ve kararlı transfeksiyon. Geçici transfeksiyonda, gen ekspresyonu sınırlı bir süre için mevcuttur; dolayısıyla genin değişmesi geçici ifadeye neden olur. Bu transfeksiyon yöntemi basit ve hızlıdır; bu nedenle rutin olarak kullanılabilir. Geçici transfeksiyonun bir dezavantajı, büyük ölçekli protein sentez sistemlerine başvurmanın zorluğudur.
Stabil transfeksiyon sırasında, bir hedef gen konak hücrenin genomuna entegre edilir ve bu nedenle gen ekspresyonu, geçici transfeksiyondan farklı olarak kalıcıdır.
Dönüşüm ve Transfection arasındaki fark nedir?
• Dönüşüm, bir genin prokaryotik bir hücreye (bakteri ve maya) eklenmesidir, buna karşın transfeksiyona genellikle bir genin bir memeli hücresine katılması denir.
• Dönüşüm, genlerde kalıtsal değişikliklerle sonuçlanırken, transfeksiyon genlerde geçici ifade veya kalıcı değişikliklerle sonuçlanabilir.
