Anahtar Farkı – Geçici ve Kararlı Transfeksiyon
Transfeksiyon, kimyasal veya fiziksel yöntemler kullanılarak ökaryotik hücrelerin gen transferinde yer alan bir işlemdir. Transfeksiyon, geçici transfeksiyon ve stabil transfeksiyon olarak adlandırılan iki ana tipte sınıflandırılabilir. Geçici transfeksiyon sırasında, ilgilenilen gen konakçı genomu ile bütünleşmez ve geçici olarak konak içinde kısa bir süre için eksprese edilirken, stabil transfeksiyonda ilgili gen, konak genomu ile bütünleşir ve birkaç nesilde uzun bir süre boyunca korunur.. Bu, geçici ve kararlı transfeksiyon arasındaki temel farktır. Her iki durumda da transfeksiyon başarılıdır ve genler ifade edilir.
Geçici Transfeksiyon Nedir?
Transfeksiyon, ökaryotik hücrelere gen eklemek için önemli bir araçtır. İki tip transfeksiyon arasında, geçici transfeksiyon, gen transferinde yaygın bir yoldur. Bir vektör aracılığıyla, yabancı genler konak hücrelerin içinde dönüştürülür. Yabancı DNA konak hücreye girdiğinde iki seçeneği vardır. Ya konakçı genomla bütünleşip çoğalabilir ya da genomla bütünleşmeden içeride kalabilir. Geçici transfeksiyon, eklenen genlerin konakçı genoma entegre olmadan geçici ekspresyonunu sergiler. Genler, hücre bölünene kadar kodlanmış proteini ifade eder ve üretir. Ancak entegrasyonun yetersizliği nedeniyle çoğalamaz ve gelecek nesillere aktarılamaz. Bu tip transfeksiyon kısa bir süre için başarılıdır. Hücre bölünmesi sırasında veya diğer bazı faktörler nedeniyle yabancı DNA bozunmaya uğrar. Geçici transfeksiyon, yabancı DNA yüksek derecede sarmal DNA formunda olduğunda gösterilir.
Şekil 01: Geçici Transfeksiyon
Kararlı Transfeksiyon Nedir?
Stabil transfeksiyon, konukçu genomuna başarılı yabancı gen entegrasyonunu gösterir. Yabancı DNA konukçu hücrenin içine girdiğinde, yabancı DNA'nın bir kısmı konukçu genomla bütünleşir ve onun bir parçası olur. Bu nedenle, yabancı DNA da çoğalır ve konukçu genomu çoğaldığında gelecek nesillere geçer. Bu tip transfeksiyon karmaşık ve nadirdir. Bununla birlikte, genoma stabil transfeksiyon nedeniyle, bu özellik birkaç nesilden oluşan daha uzun bir süre boyunca sürdürülür.
Kararlı transfeksiyon zor bir süreçtir ve DNA'nın etkin bir şekilde teslim edilmesini ve yabancı DNA'nın hücrenin genomuna alınmasını gerektirir. Bu nedenle lineer DNA, dairesel DNA'dan daha kararlı transfeksiyondan yanadır. Bununla birlikte, kararlı transfeksiyon oranı, 104 transforme edilmiş hücrelerde yaklaşık birdir. Kararlı transfeksiyon, seçilebilir bir markörün birlikte transformasyonu ve bir ortam üzerinde yapay seçimin gerçekleştirilmesiyle gözlemlenebilir.
Şekil 02: Kararlı Transfeksiyon
Geçici ve Kararlı Transfeksiyon arasındaki fark nedir?
Geçici ve Kararlı Transfeksiyon |
|
| Yabancı DNA, bir konakçı genomuna entegre olmaz. | Yabancı DNA, konak genomla bütünleşir ve onun bir parçası olur. |
| Ana Bilgisayarda Çoğ altma | |
| Geçici olarak transfekte edilmiş genler, konak içinde çoğalmaz. Bu nedenle genler sonraki nesillere aktarılmaz. | Genler konak içinde kopyalanır ve gelecek nesillere aktarılır. |
| Gen İfadesinin Süresi | |
| Genler sınırlı bir süre için ifade edilir ve ondan sonra yok edilirler. | Genler genomun bir parçası haline gelir ve uzun bir süre boyunca nesil içinde ifade edilir. |
| Kullan | |
| Bu, genlerin veya gen ürünlerinin kısa süreli ifadesinin etkilerini incelemek için kullanışlıdır. | Bu, gen ifadelerinin uzun vadeli etkilerini incelemek için kullanışlıdır. |
| Transfection Tespiti | |
| Genler ifade edilir ve bir raportör gen eklenerek kolayca tespit edilebilir. | Kararlı transfeksiyon, seçilebilir bir işaretleyici eklenerek ve ortam üzerinde yapay seçim yoluyla seçim yapılarak kolayca tespit edilebilir. |
| Oluşum ve Süreç | |
| Geçici transfeksiyon yaygındır ve gerçekleştirilmesi karmaşık değildir. | Kararlı transfeksiyon nadiren gerçekleşir ve gerçekleştirmesi karmaşıktır. |
| DNA'nın Doğası | |
| Son derece süper sarmallı DNA, geçici transfeksiyon için uygundur. | Lineer DNA, stabil transfeksiyon için uygundur. |
| Uygulamalar | |
| Bu, inhibitör RNA'larla gen yıkımı veya susturma, küçük ölçekte protein üretimi çalışmaları için kullanılır | Bu, büyük ölçekli, uzun vadeli farmakoloji çalışmalarında, gen terapisinde, uzun vadeli genetik düzenleme mekanizmaları üzerine araştırmalarda protein üretimi için kullanılır |
Özet – Geçici ve Kararlı Transfeksiyon
Geçici ve kararlı transfeksiyonlar, viral tabanlı olmayan sistemler tarafından ökaryotik hücrelere gen aktarımı sırasında gösterilen iki tip transfeksiyondur. Dönüştürülen yabancı DNA, geçici transfeksiyonda konak genomu ile entegre olmazken, stabil transfeksiyonda konak genomu ile entegre olur. Dairesel sarmal DNA, geçici transfeksiyon olarak gösterilirken, lineer DNA, stabil transfeksiyonu tercih eder. Bu, geçici ve kararlı transfeksiyon arasındaki farktır. Ancak geçici transfeksiyon, stabil transfeksiyona göre daha yaygın ve kolaydır. Ancak ikisinden birinin seçimi, gen transferinin amacına ve araştırma projesinin süresine bağlıdır.
