Anahtar Fark – Nitroselüloz ve Naylon Membran
Blotlama, moleküler biyolojideki karışımlarından belirli DNA, RNA ve protein dizilerinin saptanması için önemli bir tekniktir. Blot adı verilen bir zar kullanılarak yapılır. Kuzey, güney ve batı lekeleme gibi farklı lekeleme teknikleri vardır. Blot işlemi için uygun membran seçimi, spesifik olmayan bağlanma ve yanlış tespitleri önlemek için dikkatli bir şekilde yapılmalıdır. Nitroselüloz, naylon ve PVDF, lekeleme tekniklerinde yaygın olarak kullanılan membranlardır. Farklı özelliklere sahiptirler. temel fark nitroselüloz ve naylon membran arasında nitroselüloz membranlar yüksek protein immobilizasyon potansiyeline sahipken naylon membranlar yüksek nükleik asit immobilizasyon potansiyeline sahiptir. Ancak, blotlama tekniklerinde her iki zar türü de sıklıkla kullanılmaktadır.
Nitroselüloz Zar nedir?
Nitroselüloz membran, nükleik asit ve protein lekeleme tekniklerinde yaygın olarak kullanılan bir membran filtredir. Yüksek protein bağlama potansiyeline sahiptir. Bu nedenle nitroselüloz membranlar western blot tekniğinde yaygın olarak kullanılmaktadır. Nitroselüloz membranlar, tüm hibridizasyon teknikleri ile uyumludur ve müdahale olmaksızın üstün bağlanma kapasiteleri gösterir. Nitroselüloz membranlar doğada doğal olarak hidrofiliktir. Moleküllerle hidrofilik etkileşim kurarlar ve onları zar üzerinde etkin bir şekilde hareketsiz hale getirirler. Ticari nitroselüloz membranlar iki gözenek boyutunda mevcuttur: 0,45 ve 0,2 µm.
Şekil 01: Western blotlamada kullanılan nitroselüloz membran
Naylon Membran Nedir?
Naylon membran, lekeleme tekniklerinde kullanılan başka bir ticari membran türüdür. Alternatif olarak güney ve kuzey lekeleme için nitroselüloz membranlarla birlikte kullanılır. Naylon membranlar, DNA ile bağlanmaya karşı yüksek afinitelerinden dolayı nitroselülozdan daha güney lekeleme için idealdir. Naylon zarların birkaç benzersiz özelliği nedeniyle, araştırmacılar, nitroselüloz zar yerine güney ve kuzey lekeleme için yaygın olarak naylon zarlar kullanırlar. Nitroselülozun aksine, sıyırma ve yeniden işleme için naylon membranlar da önerilir.
Şekil 02: Güney lekeleme için kullanılan naylon membran
Nitroselüloz ve Naylon Membran arasındaki fark nedir?
Nitroselüloz ve Naylon Membran |
|
| Nitroselüloz zarlar kırılgandır. | Naylon membranlar daha az kırılgandır. |
| Taşıma | |
| İşlenmesi zordur. | Kullanmaları kolaydır. |
| Yeniden sorgulama | |
| Desteklenmeyen nitroselüloz membranların yeniden incelenmesi zordur. | Naylon membranlarla yeniden problama kolaydır. |
| Çeşitli Depolama Koşullarıyla Uyumluluk | |
| Nitroselüloz membranların çeşitli saklama koşullarına dayanma gücü daha azdır. | Naylon membranlar çeşitli saklama koşullarına daha sağlam yanıt verir. |
| Kullan | |
| Ön ıslatma gereklidir. | Naylon membranlar için ön ıslatma gerekli değildir. |
| Hidrofilik Doğa | |
| Nitroselüloz membranlar doğada hidrofiliktir ancak naylon membranlardan daha az hidrofiliktir. | Doğası gereği oldukça hidrofiliktirler. |
| Hareketsizleştirme Potansiyeli | |
| Nitroselüloz zarların nükleik asitler için daha az afinitesi vardır. Ancak proteinlere karşı yüksek bir afinitesi vardır. | Naylon membranlar, nükleik asitlerle nitroselüloz membranlardan daha yüksek bir bağlanma potansiyeline sahiptir. |
Özet – Nitroselüloz ve Naylon Membran
Nitroselüloz ve naylon membranlar, jel üzerindeki bant desenini yeniden oluşturmak için lekeleme tekniğinde kullanılan özel tabakalardır. Karışımlardan belirli bir dizi veya proteini zar üzerinde immobilize ederek tespit etme imkanı sağlarlar. Membran üzerinde hareketsiz hale getirilen moleküller, etiketli problarla hibridizasyon analizi için bir substrat olarak kullanılabilir. Nitroselüloz membran, proteinlerle yüksek bağlanma afinitesi nedeniyle western blot tekniğinde protein tespiti için yaygın olarak kullanılır. Naylon membranlar genellikle güney ve kuzey lekeleme için kullanılır. Nitroselüloz ve naylon membran arasındaki fark budur.
