Radyoimmünoassay ile immünoradyometrik test arasındaki temel fark, radyoimmünoanalizde ölçülecek numune veya bileşiğin kombinasyondan önce bir radyoaktif antijen ile birleştirilmesidir, immünoradyometrik tahlilde ise numune veya bileşik hemen radyoetiketli ile birleşir antikorlar.
İmmünoassay, bir antikor veya antijen kullanarak bir çözeltideki makromoleküllerin varlığını veya konsantrasyonunu tespit eden biyokimyasal bir testtir. Bir numunedeki antijenleri ölçmek için floresan ve radyoaktif antikorlar kullanılır. Başlangıçta antikorlar, serum protein analizi için immünopresipitasyon, immünodifüzyon ve immün-elektroforez gibi çökeltme tekniklerinde kullanıldı. Şu anda, ilaçların, tümör belirteçlerinin ve hormonların ölçümü için radyoimmünoassay ve immünoradyometrik testler gibi oldukça hassas teknikler kullanılmaktadır.
Radyoimmunoassay Testi Nedir?
Radyoimmunoassay (RIA), radyoaktif elementleri adım adım antijen-antikor komplekslerinin oluşumunda kullanan bir immünolojik testtir. RIA, bir numunedeki antijen miktarını saptamak için genellikle radyoaktif antikorlar kullanır. RIA, çok spesifik ve oldukça hassas bir in vitro testtir. DEA'nın arkasındaki ilke rekabetçi bağlayıcıdır. Burada, bir radyoaktif antijen, sabit miktarda antikor veya reseptör bağlanma bölgesi için radyoaktif olmayan bir antijene karşı rekabet eder. DEA, radyoaktif maddeler kullanıldığı için özel lisans ve önlemler gerektirir ve en ucuz teknikler arasında yer alır.
Şekil 01: İmmünoassay
RIA sırasında, bilinen miktarda antijen, tirozine bağlı iyodin gama-radyoaktif izotopları ile etiketlenerek sıklıkla radyoaktif hale getirilir. Daha sonra bu antijen bilinen miktarda antikor ile birleştirilir. Burada hem antijen hem de antikor spesifik olarak birbirine bağlanır. Daha sonra, spesifik antikorlara sahip serumdaki etiketli antijenler ve etiketlenmemiş antijenler arasında rekabetçi bir reaksiyon başlatmak için bir kan serumu örneği eklenir. Bu reaksiyonda, antikorlar belirli bir miktarda etiketli antijen salmaktadır. Bu miktar, etiketli antijenin etiketsiz antijene oranı ile orantılıdır. Son olarak, bir hastanın kan serumundaki antijen miktarını elde etmek için bir bağlanma eğrisi oluşturulur.
İmmünoradyometrik Test Nedir?
İmmünoradyometrik test (IRMA), radyoetiketli antikorları kullanan bir immünolojik testtir. IRMA'da antikorlar, radyoizotoplar kullanılarak etiketlenir. Bu antikorlar, belirli bir numunede bulunan antijenlere bağlanır. Pozitif bir numunede, radyoaktif olarak etiketlenmiş antikorlar, antijenlerin serbest epitoplarına bağlanır. Bu bir antijen-antikor kompleksi oluşturur.
İkinci reaksiyon sırasında, bağlanmamış olan etiketli antikorlar bir katı faz antijeni kullanılarak çıkarılır. Çözeltide kalan radyoaktif antikor sayısı, antijen konsantrasyonunun doğrudan bir fonksiyonudur. IRMA, reaktif olarak aşırı miktarda radyoetiketli antikorun kullanıldığı aşırı reaktif tahlili olarak bilinir. Burada, etiketli antikor veya antijenin aşırı konsantrasyonunun reaksiyona girmesine izin verilir. Son adım olarak, antijene bağlı ve serbest antikorlar ayrılır ve antijene bağlı fraksiyon radyoaktif tahlillere tabi tutulur. Burada fraksiyonun aktivitesi, antijenin konsantrasyonu ile doğru orantılıdır.
Radyoimmunoassay ve Immunoradyometric Assay Arasındaki Benzerlikler Nelerdir?
- Hem radyoimmünoassay hem de immünoradyometrik test, antijen-antikor komplekslerinin aşamalı oluşumunda radyoaktif elementleri kullanan immünoassaylerdir.
- Bir antijen-antikor kompleksi oluştururlar.
Radyoimmunoassay ile İmmünoradyometrik Test Arasındaki Fark Nedir?
Radyoimmünoassay, bir radyoizotop ile etiketlenmiş bir antijen tarafından antikor seviyelerini belirleyen bir immünoassay iken, immünoradyometrik test, aşırı konsantrasyonda radyoetiketli antikor kullanan bir aşırı reaktif testidir. Bu nedenle, radyoimmünoassay ile immünoradyometrik tahlil arasındaki temel fark budur. IRMA, RIA'dan daha yüksek hassasiyet sağlayabilir. RIA'da antijenler, iyodin gama-radyoaktif izotopları ile etiketlenirken, IRMA antikorlarında, iyodin izotopları kullanılarak etiketlenir. Dolayısıyla, bu aynı zamanda radyoimmünoassay ve immünoradyometrik tahlil arasındaki farktır. IRMA fazla reaktif bir teknik olduğundan, test RIA'dan daha kısa sürede gerçekleştirilir.
Aşağıdaki tablo, radyoimmunoassay ve immunoradyometrik test arasındaki farkları özetlemektedir.
Özet – Radyoimmunoassay vs İmmünoradyometrik Test
Radyoimmünoassay, antikor seviyelerini belirlemek için radyoaktif elementleri adım adım oluşumda kullanan bir immünolojik testtir. RIA genellikle radyoaktif antikorlar kullanır. Bir radyoaktif antijen, sabit miktarda antikor veya reseptör bağlanma bölgesi için radyoaktif olmayan bir antijene karşı rekabet eder. İmmünoradyometrik tahlil, radyoaktif olarak işaretlenmiş antikorlar kullanılarak bir numunenin antijen seviyelerini belirlemek için gerçekleştirilen bir bağışıklık tahlilidir. Bu antikorlar, belirli bir numunede bulunan antijenlere bağlanır. Her tahlilin sonunda bir antijen-antikor kompleksi oluşur. Tahlillerin sonuçlarını elde etmek için bir bağlanma eğrisi çizilir. Radyoimmünoanalizde, etiketli antijen miktarı, etiketli antijenin etiketsiz antijene oranı ile orantılıdır, ancak bir immünoradyometrik analizde, antijene bağlı fraksiyonun aktivitesi, antijenin konsantrasyonu ile doğru orantılıdır. Bu, radyoimmünoassay ile immünoradyometrik test arasındaki farkın özetidir.
