Kolorometrik ve florometrik tahlil arasındaki temel fark, kolorimetrik tahlilin bir çözeltideki renkli bileşiklerin konsantrasyonunu belirlemesi, florometrik tahlilin ise bir çözeltinin kinetik mekanizmasını belirlemesidir.
Biyokimyasal tahlil, biyolojik bir molekülün veya maddenin aktivitesini analitik olarak saptayan veya nicelleştiren bir tekniktir. Bu in vitro bir süreçtir. Kolorimetrik tahlil ve florometrik tahlil, laboratuvarlarda gerçekleştirilen iki tür yaygın biyokimyasal tahlildir. ELISA ve western blotlama gibi çoklu teknikler aynı zamanda proteinler, enzimler ve diğer küçük moleküller gibi biyomoleküllerin fonksiyonel davranışlarının ölçülmesi ve metabolik aktivitenin nicelleştirilmesi için karmaşık biyokimyasal tahlillerdir. Bu tür testler, protein-DNA, protein-RNA ve protein-protein etkileşimlerinin tanımlanması için kullanılır.
Kolorimetrik Test Nedir?
Kolorimetrik tahlil, bir çözeltideki renkli bileşiklerin konsantrasyonunu belirleyen bir tekniktir. Başka bir deyişle, kolorimetrik tahlil, reaktifler ve analitler arasındaki enzimatik veya kimyasal reaksiyon nedeniyle renk değişikliğine yol açan bir reaksiyondur. Kolorimetrik testler, enzimleri, spesifik bileşikleri, hormonları, antikorları ve diğer analitleri test etmek için biyokimyada uygulanmaktadır. Kolorimetreler veya spektrofotometreler kullanırlar. Kolorimetreler, renk özelliklerinin objektif bir ölçümünü sağlamak için renkli örnekleri karakterize eden araçlardır. Spektrofotometre, ışığın renginin veya dalga boyunun bir fonksiyonu olarak ışık yoğunluğunu ölçen bir cihazdır.
Şekil 01: Kolorimetrik Test
Kolorimetrik Test Nasıl Çalışır?
Bir kolorimetrik tahlilde, kuyulara bağlı belirli bir antikorla bir plaka hazırlanır. Daha sonra numune eklenir. Bu, numunenin antikora bağlanmasına izin verebilir. Daha sonra, tespit probu ile reaksiyona girmek üzere kuyulara bir tespit antikoru ve bir substrat eklenir. Durdurma solüsyonu okumadan önce sonuna eklenir. Kör olarak adlandırılan boş bir kuyu numune olmadan bırakılır. Kolorimetrik tahlilde, renk ne kadar koyuysa analit konsantrasyonu o kadar fazladır. Genellikle, okumayı almak için yalnızca bir dalga boyu gereklidir. Ancak referans ölçüm varsa iki veya daha fazla dalga boyu kullanılır.
Florometrik Test Nedir?
Florometrik tahlil, enzim reaksiyonlarının kinetik mekanizmasını belirleyen bir tekniktir. Bir florometrik tahlil, floresan olmayan bir substrattan bir floresan ürün oluşumuyla veya tam tersi gerçekleşir. Bu tahlil ayrıca, enzimatik reaksiyonun substrattaki iki floroforun pozisyonunu değiştirdiği ve böylece floresan yoğunluğunu değiştirdiği floresan rezonans enerji transferini (FRET) kullanır.
Şekil 02: Florometrik Test
Florometrik testler genellikle diğer testlerden çok daha hassastır. Hastaların doku, hücre veya sıvı örneklerindeki tanısal enzim tahminleri, duyarlılığının yüksek olması nedeniyle artar.
Florometrik Test Nasıl Çalışır?
Bir florometrik tahlilde, plakadaki numuneye bir substrat eklenir ve plaka okuyucu kullanılarak floresan yanıtı alınır. Burada her hücre ayrı ayrı ölçülür. Florometrik deneylerde opak plakalar kullanılır. Bu, ışığın saçılmasını az altır. Bu tip bir tahlil için iki dalga boyu gereklidir. Bir dalga boyu uyarımı algılamak içindir ve diğer dalga boyu emisyon içindir.
Kolorimetrik ve Florometrik Test Arasındaki Benzerlikler Nelerdir?
- Kolorimetrik tahlil ve florometrik tahlil, iki tür biyokimyasal tahlildir.
- Her iki test de tıbbi teşhis için gerçekleştirilir.
- Bu testler enzimatik bir reaksiyon içerir.
- Her iki test de bir substrat ve analitler içerir.
Kolorimetrik ve Florometrik Test Arasındaki Fark Nedir?
Kolorometrik tahlil, bir çözeltideki renkli bileşiklerin konsantrasyonunu belirleyen bir tekniktir, florometrik tahlil ise enzim reaksiyonlarının kinetik mekanizmasını belirleyen bir tekniktir. Bu, kolorimetrik ve florometrik tahlil arasındaki temel farktır. Ayrıca, florometrik deneyler kolorimetrik deneylerden daha hassastır; bu nedenle, florometrik testler daha fazla analiti tespit etme yeteneğine sahiptir. Dolayısıyla, bu kolorimetrik ve florometrik tahlil arasındaki bir diğer önemli farktır. Ayrıca, florometrik testler iki dalga boyu gerektirirken kolorimetrik testler bir dalga boyu ile gerçekleştirilir.
Aşağıdaki infografik, kolorimetrik ve florometrik tahlil arasındaki daha fazla farkı tablo haline getiriyor.
Özet – Kolorimetrik vs Florometrik Test
Biyokimyasal tahlil, hücresel metabolik reaksiyonları belirlemek ve ölçmek için kullanılan analitik bir süreçtir. Kolorimetrik tahlil ve florometrik tahlil, iki tür biyokimyasal tahlildir. Kolorimetrik deney, reaktifler ve analitler arasındaki enzimatik veya kimyasal reaksiyon nedeniyle renk değişikliğine yol açan bir reaksiyon iken florometrik deney, enzim reaksiyonlarının kinetik mekanizmasını belirlemek için kullanılan bir tekniktir. Her iki tahlil de bir substrat ve bir analit içeren bir enzimatik reaksiyona bağlıdır. Florometrik testler, kolorimetrik testlerden daha hassastır. En önemlisi, florometrik testler iki dalga boyu gerektirirken kolorimetrik testler sadece bir dalga boyu ile gerçekleştirilebilir. Böylece, bu kolorimetrik ve florometrik tahlil arasındaki farkı özetler.
