Toplam hücre sayısı ile canlı hücre sayısı arasındaki temel fark, toplam hücre sayısının bir numunedeki hem canlı hem de ölü mikrobiyal hücreler dahil tüm hücreleri tahmin etmesi, canlı hücre sayısının ise bir numunedeki yalnızca canlı mikrobiyal hücreleri tahmin etmesidir.
Bir popülasyondaki organizmaların sayısını saymak, çoğu deneysel çalışma için gerekli kabul edilir. Bu nedenle, bir numunedeki mikrop sayısını doğrudan ve dolaylı yöntemlerle analiz etmeye çalışıyoruz. Doğrudan ölçümler, hücre numaralarını doğrudan sayan yöntemleri içerir. Dolaylı ölçümler, hücre yoğunluğu, kuru ağırlık vb. gibi hücre sayısı ile ilgili olabilecek bazı parametrelerin ölçülmesini içerir. Bazı yöntemler, bir numunedeki yalnızca canlı mikrobiyal hücrelerin miktarını belirler. Canlı hücre sayımı böyle bir yöntemdir. Doğrudan mikroskobik sayımlar, bir mikroskop kullanarak bilinen bir ortam/numune hacmindeki tüm hücreleri nicelendirir. Bu nedenle, hem canlı hem de ölü hücreleri sayar. Toplam hücre sayısının bir türüdür.
Toplam Hücre Sayısı Nedir?
Toplam hücre sayımı, bilinen bir hacimdeki/örnekteki tüm hücrelerin bir mikroskop ve bir sayım odası (hemositometre) kullanılarak sayılmasını içeren yöntemdir. Canlı sayıların aksine, hem canlı hem de ölü hücreler sayılır. Bu nedenle, gözlem sırasında bir canlılık lekesi uygulanmadığı sürece bu toplam sayıdır. Mikroskopide, hücreler doğrudan mikroskop altında gözlenir ve sayılır. Mikrobiyal hücrelerden oluşan bir hücre süspansiyonu kullanır. Sayma kolaylığı ve doğru ölçümler için numunenin seyreltilmesi yapılabilir. Çok yüksek/düşük hücre konsantrasyonlarında, bir mikroskop kullanarak toplam hücre sayısını elde etmek zor bir iştir.
Şekil 01: Sayma Odası – Hemositometre
Sayma odaları kolay, ucuzdur ve toplam hücre sayımını almada hızlıdır. En önemlisi, sayım odaları hem ökaryotları hem de prokaryotları saymak için kullanışlıdır. Toplam hücre sayısını ölçmek için hacmi bilinen seçilmiş karelerdeki hücreleri sayarız.
Viable Cell Count nedir?
Canlı hücre sayımı, bir numunedeki canlı mikrobiyal hücreleri saymanın bir yöntemidir. Sadece numunedeki canlı hücreleri sayar. Canlı plaka sayımı, membran filtrasyonu ve en olası sayı, birkaç canlı hücre sayımı tekniğidir. Bu yaklaşımlar büyüme temellidir. Canlı plaka sayımı yöntemi, gıda ve süt mikrobiyolojisi, tıbbi mikrobiyoloji, çevresel mikrobiyoloji, mikrobiyal genetik, büyüme ortamı geliştirme ve biyoteknoloji dahil olmak üzere birçok mikrobiyolojik alanda kullanılan güçlü bir yöntemdir.
Canlı bakterileri saymanın en yaygın yolu, bir agar besiyerinde koloni oluşturabilen bir numune kullanmaktır. Plaka sayımı yapmanın iki ana yolu vardır: yayma plaka tekniği ve dökme plaka tekniği. Bilinen bir numune hacmi, bir agar plakasının yüzeyine yayılabilir veya agar içine karıştırılabilir. Plaka daha sonra inkübe edilir ve ortaya çıkan koloniler sayılır. Koloni sayısı, orijinal numune içindeki mikroorganizmaların sayısı ile ilgilidir. Canlı sayılar yalnızca canlı ve büyüyen hücreleri ölçer.
Şekil 02: Uygulanabilir Plaka Sayısı
En olası sayı (MPN), canlı hücrelerin popülasyon yoğunluğunu tahmin etmek için plaka sayım yöntemlerine bir alternatiftir. Sıvı kültürde büyüyen organizmaları sayar ve bu nedenle ağırlıklı olarak bakteriyolojik bir tekniktir. Özellikle düşük konsantrasyonlardaki organizmalar için yararlıdır, örn. süt, içme suyu.
Membran filtrasyon tekniği, bir şehrin su kaynağında olduğu gibi mikroplar çok seyreltik olduğunda daha uygundur. Basitçe bilinen bir hacimdeki sıvıyı bir filtreden geçirerek ve bir besin ortamında inkübe ederek yapılır. Filtrede gelişen koloniler sayılır ve numunenin mililitresindeki bakteri sayısı hesaplanır.
Toplam Hücre Sayısı ile Canlı Hücre Sayısı Arasındaki Benzerlikler Nelerdir?
- Toplam hücre sayısı ve canlı hücre sayısı, hücreleri ölçen iki tür mikrobiyal tekniktir.
- Mikrobiyoloji laboratuvarlarında yaygın olarak kullanılan numaralandırma teknikleridir.
Toplam Hücre Sayısı ile Canlı Hücre Sayısı Arasındaki Fark Nedir?
Toplam hücre sayısı, bir numunedeki tüm canlı ve ölü mikrobiyal hücreleri numaralandırır. Buna karşılık, canlı hücre sayımı, yalnızca bir numunedeki canlı hücreleri numaralandırır. Bu, toplam hücre sayısı ile canlı hücre sayısı arasındaki temel farktır. Toplam hücre sayısı, agar plakalarındaki kolonilerin büyümesinden bağımsızdır, canlı hücre sayımı ise büyümeye dayalı bir tekniktir ve agar plakalarındaki mikrobiyal kolonilerin büyümesine bağlıdır.
Aşağıdaki bilgi grafiği, toplam hücre sayısı ile canlı hücre sayısı arasındaki farkı özetler.
Özet – Toplam Hücre Sayısı ve Canlı Hücre Sayısı
Toplam hücre sayısı hem canlı hem de ölü mikrobiyal hücreleri sayarken, canlı hücre sayısı yalnızca canlı hücreleri sayar. Bu nedenle, toplam hücre sayısı ile canlı hücre sayısı arasındaki temel fark budur. Ayrıca, canlı hücre sayımı, toplam hücre sayısından farklı olarak büyümeye dayalı bir tekniktir. Ayrıca, görünür koloniler elde edilene kadar plakların inkübasyonu gerekir. Canlı plaka sayımı, MPN ve membran filtrasyonu canlı hücre sayımı için birkaç teknikken, direkt mikroskopi ve hemositometre kullanımı toplam hücre sayımı için iki tekniktir.
