İzokratik ve gradyanlı elüsyon arasındaki temel fark, izokratik elüsyonun mobil fazda sabit bir konsantrasyonun korunmasını ifade etmesidir, gradyan elüsyonunun ise mobil fazda değişen bir konsantrasyonun korunmasını ifade etmesidir.
İzokratik ve gradyan elüsyon terimleri kromatografide kullanılır. Bir kromatografik çalışma sırasında, hareketli bir madde olan hareketli bir faz ile birlikte hareket etmeyen bir madde olan sabit bir faz kullanırız. İzokratik ve gradyanlı elüsyon, mobil fazın özelliklerini tanımlar.
İzokratik Elüsyon Nedir?
İzokratik elüsyon, hareketli faz sabit bir konsantrasyona sahip olduğunda kromatografide kullanılan bir terimdir. Burada hareketli fazın konsantrasyonu kromatografik süreç boyunca sabittir. Bu işlemde kromatogramda lineer olarak alıkonma süresi ile artan pik genişliğini gözlemleyebiliriz. Bununla birlikte, bu bir dezavantaja yol açar - geç elüsyon için geç elüsyon yapan pikler çok düz ve geniş olur. Bu nedenle, bu geniş zirvelerin zirve olarak tanınması zorlaşır.
Ayrıca izokratik elüsyonda seçicilik sütun boyutlarına göre değişmez. Bu, seçiciliğin sütun boyutlarındaki değişikliklere bağlı olmadığı anlamına gelir. Burada uzunluk ve çap kolon boyutları olarak kabul edilir. Bu nedenle, zirveler aynı sırada ayrışır.
Gradient Elution nedir?
Gradient elüsyon, mobil fazın değişen bir konsantrasyona sahip olduğu durumlarda kromatografide kullanılan bir terimdir. Başka bir deyişle, mobil fazın konsantrasyonunun sabit kalması gerekmez. Örneğin, HPLC'de yaygın bir ayırma yöntemi, başlangıçta %10 metanol kullanır ve konsantrasyonu kademeli olarak artırarak %90'da biter. Mobil fazın iki bileşeni vardır: zayıf bir çözücü ve güçlü bir çözücü. Zayıf çözücü, çözünen maddenin yavaş elüsyonuna izin verirken, güçlü çözücü, çözünen maddenin hızlı elüsyonuna neden olur. Ters faz kromatografisinde, zayıf çözücü olarak su ve güçlü çözücü olarak organik çözücü kullanırız.
Şekil 01: HPLC
Ayrıca, gradyan elüsyon yöntemi daha sonra ayrıştırılan bileşenleri daha hızlı ayrıştırmak için az altır ve kromatogramda dar bir tepe noktası verir. Bu yöntem, tepe şeklini ve tepe yüksekliğini de iyileştirir. Ayrıca, gradyan elüsyon tekniğinde, kolon boyutlarındaki değişikliklerle elüsyon sırası değişir.
İzokratik ve Gradyan Elüsyon Arasındaki Fark Nedir?
İzokratik ve gradyan elüsyon terimleri kromatografide kullanılır. İzokratik ve gradyanlı elüsyon, mobil fazın özelliklerini tanımlar. İzokratik ve gradyanlı elüsyon arasındaki temel fark, izokratik elüsyon mobil fazda sabit bir konsantrasyonun korunmasını ifade ederken, gradyan elüsyonu mobil fazda değişen bir konsantrasyonun korunmasını ifade eder.
İzokratik elüsyon tekniğinde, pik genişliği tutma süresi ile doğrusal olarak artar. Bununla birlikte, gradyan elüsyon tekniğinde, daha sonra yıkanan bileşenlerin alıkonması az altılır, böylece elüsyon daha hızlı olur ve dar pikler verir. Bunun dışında izokratik elüsyonda seçicilik sütun boyutlarına bağlı değildir, ancak gradyan elüsyonda değişen sütun boyutlarıyla seçicilik değişir.
Aşağıdaki tablo izokratik ve gradyanlı elüsyon arasındaki farkı özetler.
Özet – İzokratik ve Gradyan Elution
İzokratik elüsyon ve gradyan elüsyon mobil fazın özelliklerini tanımlar. İzokratik ve gradyanlı elüsyon arasındaki temel fark, izokratik elüsyon mobil fazda sabit bir konsantrasyonun korunmasını ifade ederken, gradyan elüsyonu mobil fazda değişen bir konsantrasyonun korunmasını ifade eder.
