Mikronükleus ve kuyruklu yıldız tahlili arasındaki temel fark, mikronükleus tahlilinin mutajen maruziyetinin bir sonucu olarak kromozomal hasarı kontrol etmek için önemli olduğu, kuyruklu yıldız tahlilinin ise tek tek hücrelerdeki birincil DNA hasarını tespit etmek için önemli olmasıdır.
Genotoksisite testleri, mutasyonların ve kromozomal anormalliklerin olasılıklarını değerlendirmeye yardımcı olur. Genotoksinler kimyasal maddeler ve radyasyon içerir. Kanserojenler, mutajenler ve teratojenler, genotoksinlerin ana kategorileridir. Nokta mutasyonları, delesyonlar, tek ve çift zincir kırıkları, kromozomal aberasyonlar, mikronükleus oluşumları, DNA onarımı ve hücre döngüsü etkileşimleri gibi çeşitli hasarlara neden olurlar. Bu tür durumlar, çok çeşitli hastalıklara yol açabilir ve genotoksisite deneyleri, bu koşullardan kaynaklanan potansiyel hasarı önler. Mikronükleus testi ve kuyruklu yıldız testi, genotoksisite testleri altındaki iki tekniktir.
Mikronükleus Testi Nedir?
Mikronükleus testi, mutajen maruziyetinin bir sonucu olarak kromozomal hasarı değerlendirmek için bir testtir. İğ oluşumuna ve mikronükleusa neden olan kimyasalların taranmasında önemlidir. Bir mikronükleus tahlili, kromozom yapısı ve işlevine müdahale ederken kimyasalların stabilitesi hakkında bilgi sağlar. Mikronükleus tahlillerinde birçok kanserojen test pozitiftir. Tahlil süreci, kimyasal bir muameleyi ve mikroçekirdekli hücrelerin sıklığını ölçmeyi içerir. Mikronükleus hücrelerinin sayısında anormal bir artış varsa, kimyasalın kromozomal hasara neden olduğu sonucuna varılır.
Bir mikronükleus tahlili genellikle aktif olarak bölünen hücreler üzerinde gerçekleştirilir. Bu nedenle, hücre bölünmeleri yoluyla üretilen eritrositler ve kemik iliği kök hücreleri, bu tür testler için ideal adaylardır. Sürekli ve hızlı bir ciro yaşarlar. Eritrositlerin gerçek çekirdekleri olmadığı için, testin sonunda mikroçekirdekli hücreleri daha görünür hale getirir.
Şekil 01: Mikronükleus Testi Gözlemi
Mikronükleus tahlilleri ekonomik, daha hızlı, kullanışlıdır ve yürütmek için daha az beceri gerektirir. Kromozom anormalliklerini hızlı bir şekilde güvenilir bir şekilde yansıtırlar ve kromozomal hasarları hızlı bir şekilde değerlendirmek için son derece faydalıdırlar. Özel ve çok yönlü bir mikronükleus tahlili türü, sitokinez blok mikronükleus sitome (CBMNcyt) tahlilidir. Hücrelerdeki kromozomal hasarı ve kararsızlığı ölçmek için tercih edilen tahlildir. Bununla birlikte, mikronükleus tahlili kullanmanın temel sorunu, farklı kromozomal sapma türlerini belirleyememesi ve tahlilin, mitotik hız ve hücre ölüm oranı üzerinde bir etkiye sahip olması ve sonuçların değişmesine neden olmasıdır.
Comet Assay nedir?
Tek jel elektroforez testi olarak da bilinen Comet testi, DNA hasarını tespit etmek için basit ve hassas bir tekniktir. Ökaryotik hücrelerdeki DNA kırılmalarını ölçer ve biyoizleme ve genotoksisite testi için standart bir tekniktir.
Kuyruklu yıldız tahlili, düşük erime noktalı agaroz süspansiyonlarında hücrelerin kapsüllenmesinde, hücrelerin nötr veya alkali koşullarda parçalanmasında ve askıda parçalanmış hücrelerin elektroforezinde yer alır. Kapsülleme işlemi sırasında hücreler, erimiş düşük erime noktalı agaroz içinde süspanse edilir ve agaroz, onları yerinde tutturmak için bir karbonhidrat lifleri matrisi oluşturur. Agaroz ozmotik olarak nötrdür; bu nedenle solüsyonların jele nüfuz etmesini ve hücreleri bozmadan ve kaydırmadan etkilemesini sağlar. Lizis solüsyonu, oldukça konsantre bir sulu tuz solüsyonu ve bir deterjandır. Bu tuz, hücrenin RNA içeriğini bozarken, hücre içindeki proteinleri ve bağlanma modellerini bozar. Hücreler yok eder ve tüm proteinler, RNA, sitoplazmik ve nükleoplazmik bileşenler bozulur ve agaroz matrisine dağılır ve DNA'yı bırakır.
Şekil 02: Kuyruklu Yıldız Testi
Elektroforez çözeltisi, DNA çift sarmalının denatüre olduğu ve nükleoidin tek sarmallı hale geldiği bir alkali çözeltidir. Bu işlem sırasında görüntüleri analiz etmek için bir elektrik alanı uygulanır. Görüntü analizi, DNA ve nükleoid için floresansın genel yoğunluğunu ölçer ve ikisini karşılaştırır. Genel yapı, kalan hasarsız DNA'ya karşılık gelen dairesel bir kafaya ve hasarlı DNA için bir kuyruğa sahip bir kuyruklu yıldıza benzer. Daha güçlü sinyaller nedeniyle kuyruk ne kadar parlak ve uzun olursa, hasar seviyesi o kadar yüksek olur.
Mikronükleus ve Comet Assay Arasındaki Benzerlikler Nelerdir?
- Mikronükleus ve kuyruklu yıldız tahlili ekonomik, daha hızlı, kullanışlı ve daha az beceri gerektirir.
- Genelde DNA üzerinde gerçekleştirilirler.
- Her iki test de mutasyonların ve kromozomal anormalliklerin değerlendirilmesine yardımcı olur.
- Ayrıca, her iki teknik de prosedürü gerçekleştirmek için kimyasallar kullanır.
Mikronükleus ve Kuyruklu Yıldız Testi Arasındaki Fark Nedir?
Mikronükleus testi, mutajen maruziyetinin bir sonucu olarak kromozomal hasarı kontrol etmede önemlidir, kuyruklu yıldız testi ise tek tek hücrelerde birincil DNA hasarını tespit etmede önemlidir. Bu nedenle, mikronükleus ve kuyruklu yıldız tahlili arasındaki temel fark budur. Ayrıca mikronükleus tahlili, klastojenisiteyi ve anojenisiteyi tespit etmek için iyi bir şekilde oluşturulmuştur. Kuyruklu yıldız tahlili, hücrelerdeki birincil DNA hasarını tespit etmek için bir genotoksisite testi olarak kullanılır. Ayrıca, bir mikronükleus tahlili, kimyasalların stabilitesi hakkında bilgi sağlarken, bir kuyruklu yıldız tahlili, tek hücreli bir jel elektroforezidir.
Aşağıdaki infografik, mikronükleus ve kuyruklu yıldız tahlili arasındaki farkları yan yana karşılaştırma için tablo halinde sunar.
Özet – Mikronükleus ve Kuyruklu Yıldız Testi
Genotoksisite testleri, mutasyonların ve kromozomal anormalliklerin olasılıklarını değerlendirmeye yardımcı olur. Mikronükleus tahlili ve kuyruklu yıldız tahlili, genotoksisite tahlilleri altındaki iki tekniktir. Mikronükleus testi, mutajen maruziyetinin bir sonucu olarak kromozomal hasarı değerlendirir. Comet tahlili, DNA hasarını tespit etmek için basit ve hassas bir tekniktir. Bu, mikronükleus ve kuyruklu yıldız tahlili arasındaki temel farktır. Mikronükleus testi, iğ oluşumuna ve mikronükleusa neden olan kimyasalların taranmasında önemlidir. Comet tahlili, düşük erime noktalı agaroz süspansiyonlarında hücrelerin kapsüllenmesinde, hücrelerin nötr veya alkali koşullarda parçalanmasında ve askıya alınmış parçalanmış hücrelerin elektroforezinde yer alır.
