Anahtar Farkı – CFU ve MPN
Koloni oluşturan birim (CFU) ve En olası sayı (MPN), numunelerdeki mikroorganizmaları saymak için kullanılan iki yöntemdir. Her iki parametre de su numunelerinde su kalitesini ve fekal indikatör bakterileri tespit etmek için kullanılır. Koloni oluşturan birim, belirli bir örneğin belirli bir hacmi veya ağırlığı içindeki canlı bakteri hücrelerinin veya mantar hücrelerinin sayısını saymak için kullanılan bir ölçüdür. Bu parametrenin standart birimi CFU/ml veya CFU/g'dir. En olası sayı, sıvı bir numunedeki canlı bakteri hücrelerinin sayısını ölçmek için kullanılan başka bir birimdir. CFU ve MPN arasındaki temel fark, CFU'nun katı bir agar plakası üzerinde büyüyen bakteri ve mantar kolonilerinden hesaplanması, MPN'nin ise sıvı bir ortamda büyüyen canlı bakterilerden hesaplanmasıdır.
CFU nedir?
Koloni oluşturan birim (CFU), belirli bir numunedeki canlı bakteri veya mantar hücrelerinin sayısını ölçen bir parametredir. Koloni oluşturan birimleri sayan yönteme standart plaka sayımı denir. Agar plakalarında görünen canlı koloniler, sıvılar için numunenin 1 ml'si (mililitre başına koloni oluşturan birim) başına CFU veya katılar için numunenin 1 g'si (bir gram başına koloni oluşturan birim) başına CFU olarak ifade edilir.
Bir örnekte CFU'yu ölçmek için kullanılan iki yaygın yöntem vardır. Yayma plaka yöntemi ve dökme plaka yöntemidir. Bu iki yöntem, seri seyreltme adı verilen bir teknikle desteklenir. Seri olarak seyreltilmiş numuneler, agar yüzeyinde sayılabilir sayıda koloni elde edilmesini sağlar. Bilinen bir hacimde numune bir agar plakasının yüzeyine yayılabilir veya agar ile karıştırılıp bir plaka üzerine dökülebilir. Plaka daha sonra inkübe edilir ve ortaya çıkan koloniler sayılır. Koloni sayısı, orijinal numune içindeki mikroorganizmaların sayısı ile ilgilidir. Çok fazla koloni veya çok az koloni gösteren plaklar, sonuçların bu plaklarda istatistiksel olarak doğru olmayabileceği için sayımdan çıkarılır. İstatistiksel olarak en iyi aralık bir agar plakasında 30 – 300 kolonidir. Bu nedenle, doğru numaralandırma için doğru plakalar seçilmelidir. Yukarıdaki fonksiyon için seri seyreltme yapılır.
Plakalardaki canlı kolonilerin sayısını saydıktan sonra, CFU/ml aşağıdaki denklem kullanılarak hesaplanabilir.
Orijinal numunenin ml'si başına CFU=bir plakadaki koloni sayısı X seyreltme faktörü
Seyreltme faktörü=(1/ Plakanın seyreltilmesi)
Örneğin, 10-4 seyreltme plakasında 149 koloni elde ederseniz, orijinal numunenin 1 ml'sindeki bakteri sayısı aşağıdaki gibi hesaplanabilir.:
CFU/ml=(149) x (1/10-4)
=149 × 104 veya 1490000
=1. 49 x 106
Şekil 01: Koloni Oluşturma Birimi
MPN nedir?
En olası sayı, CFU/ml'ye alternatif bir ölçüdür. MPN ayrıca sıvı bir numunedeki canlı hücreleri de tahmin eder. Sıvı bir kültürde büyüyen organizmaları sayar ve ağırlıklı olarak bakteriyolojik bir tekniktir. Bu yöntem özellikle düşük konsantrasyonlarda bakteri hücresi içeren numuneler için yararlıdır; örneğin süt, içme suyu vb. MPN değeri 100 ml hacim için ifade edilir. MPN, olasılık teorisine dayanan istatistiksel bir yönteme dayanır. Numunenin 100 ml'si başına MPN değerlerini bulmak için tasarlanmış istatistiksel tablolar vardır. Bu tablolar, sonuçları %95 güven sınırlarında göstermektedir.
MPN değeri, çoklu tüp fermantasyon yöntemi adı verilen bir teknik uygulandıktan sonra hesaplanır. Uygun bir kültür ortamı içeren üç set tüp, 10 ml, 1 ml ve 0 gibi üç farklı numune hacmiyle aşılanır.1 ml ve büyüme için inkübe edildi. İnkübasyon periyodundan sonra tüpler, büyümenin varlığı veya yokluğu için + (pozitif) veya - (negatif) olarak puanlanır. Pozitif ve negatif sonuçların modeli daha sonra mikroorganizmaların sayısını tahmin etmek için bir MPN istatistiksel olasılık tablosu ile karşılaştırılır. Daha sonra numunenin 100 ml'si için MPN değeri verilir. MPN, su örneklerinde bulunan koliform bakterilerini tespit etmek için yaygın olarak kullanılır.
Şekil 02: MPN tablosu
CFU ve MPN arasındaki fark nedir?
CFU vs MPN |
|
| CFU, belirli bir numunedeki canlı bakteri veya mantar kolonilerinin sayısını ifade etmek için kullanılan bir ölçüdür. | MPN, CFU'ya alternatif bir ölçüdür ve sıvı bir numunedeki canlı bakteri hücrelerinin sayısını ölçer. |
| Birim | |
| CFU/ml veya CFU/g | MPN/100 ml |
| Hesaplama | |
| CFU, agar plakalarında yetiştirilen kolonilerin sayısı sayılarak hesaplanır. | MPN, tüplerin pozitif ve negatif modellerini MPN istatistik tablosu ile karşılaştırarak hesaplanır. |
| Seri Seyreltme Tekniği | |
| Seri seyreltme, numuneleri agar plakalarına yerleştirmeden önce gerçekleştirilir. | MPN hesaplandığında seri seyreltme normal olarak gerçekleştirilmez |
| Yöntemler | |
| Yayma plakası yöntemi ve dökme plakası yöntemi, CFU elde etmek için gerçekleştirilen iki tür yöntemdir. | Çoklu tüp fermantasyonu, MPN değeri elde etmek için gerçekleştirilen yöntemdir. |
Özet – CFU ve MPN
Mikrobik büyümenin ölçülmesi birçok nedenden dolayı gereklidir. Gıda işleme tesislerinde, gıdalardaki mikroorganizmaların seviyesini ve türünü ölçmek gerekir. Gıda sanayinde ve tıpta sterilizasyon tedavilerinin etkin bir şekilde uygulanmasının sağlanması gerekmektedir. Kanalizasyon arıtma tesislerinde rutin olarak mikrobiyal sayım yapılması gerekmektedir. Moleküler biyolojide prosedürü optimize ederken, plakalardaki koloni sayısını ölçmek gerekir. Bu nedenle, farklı numaralandırma ve büyüme ölçüm yöntemleri mevcuttur. CFU ve MPN, çeşitli alanlarda yaygın olarak benimsenen bu tür iki yöntemdir. CFU, belirli bir numunede bulunan canlı bakteri ve mantar kolonilerinin sayısının bir ölçüsüdür. Standart plaka sayım yöntemi veya canlı plaka sayım yöntemi kullanılarak hesaplanır. MPN, sıvı numunenin belirli bir hacminde bulunan bakteri hücrelerinin sayısını ifade eden başka bir ölçüdür. Çoklu tüp fermantasyon yöntemi ve MPN tablosu kullanılarak hesaplanır. CFU ve MPN arasındaki fark budur.
CFU ve MPN'nin PDF Sürümünü İndir
Bu makalenin PDF sürümünü indirebilir ve alıntı notlarına göre çevrimdışı amaçlarla kullanabilirsiniz. Lütfen PDF sürümünü buradan indirin CFU ve MPN Arasındaki Fark.
