Anahtar Fark – Phusion ve Taq Polimeraz
DNA polimerazlar moleküler biyoloji tekniklerinde yaygın olarak kullanılan enzimlerdir ve ayrıca DNA replikasyonuna maruz kalan tüm organizmalarda doğal olarak bulunurlar. Replikasyon sırasında yer alan anahtar polimerize edici enzimlerdir. DNA polimeraz, DNA zincirinin serbest 3' ucuna nükleotidler ekleyerek yeni bir zincirin uzamasına neden olabilir. Günümüzde moleküler biyolojinin hastalık teşhisi ve endüstriyel uygulamalardaki gelişmeleri nedeniyle, çeşitli faydalı özelliklere sahip polimerazların üretilmesi önemlidir. Bu, yöntemin doğruluğunu arttırır ve daha hızlı bir teknik haline getirir. Phusion ve Taq polimeraz, özel moleküler uygulamalarda kullanılan, ticari olarak üretilen iki termostabil polimeraz enzimidir. Phusion, Pyrococcus furiosus'tan izole edilen bir DNA polimerazdır ve aslına uygunluğu artırmak için çoğunlukla klonlama deneylerinde kullanılır. Taq DNA Polimeraz, Polimeraz Zincir Reaksiyonunda (PCR) kullanılan standart DNA polimerazdır ve termostabil bakteriden izole edilir; Termos aquaticus. İki enzim arasındaki temel fark, kaynak mikroorganizmadır. Phusion ekstremofil Pyrococcus furiosus'tan izole edilirken, Taq polimeraz termofil Thermus aquaticus'tan izole edilir.
Phusion nedir?
Phusion DNA polimeraz, enzimin ekstremofilik bir Archaea olan Pyrococcus furiosus'tan izole edilmesiyle üretilen yeni bir polimerazdır. Bu mikroplar son derece yüksek sıcaklık koşullarında bulunur, bu nedenle polimerazı yüksek derecede ısıya dayanıklı bir polimeraz haline getirir. Phusion polimeraz, geleneksel termostabil polimeraz üzerinde aşırı aslına uygunluk elde etmek için kullanılır; Taq polimeraz. Phusion polimeraz, 7.5 kb genomik DNA'ya kadar uzun şablonları çoğ altabilir. Phusion polimerazın optimal polimerizasyon kapasitesi 720 C'dedir. Phusion, dizileme, ifade analizi ve mutasyon analizi için ürünlerin klonlanmasında da kullanılır.
Phusion DNA polimeraz 3' – 5' eksonükleaz aktivitesine sahiptir. Bu, sentezden sonra yeni sentezlenen ipliğin yeniden okunmasına izin verir. Bu nedenle, nükleotid uyumsuzlukları kolayca onarılabilir. Bu nedenle daha az hata oranına sahiptir. Phusion polimerazın genel avantajları;
- Aşırı Sadakat
- Yüksek Hız ve az altılmış uzatma süresi
- Güçlü Tepkiler ve minimum optimizasyon gerektirir
- Yüksek Verim
Şekil 01: Phusion
Phusion polimerazın ana dezavantajı, deoksiüridin trifosfat (dUTP) varlığında inhibe edilmesidir. dUTP'ler reaksiyon karışımında biriktiğinde, Phusion polimerazın hareketlerini engelleyebilir. Bu, enzimin eklenmesinden önce reaksiyon karışımının dUTPase ile işlenmesiyle önlenir. Şu anda, bu soruna çare olarak Phusion polimeraz yerine Pfu Turbo olarak bilinen Phusion polimerazın dUTP dirençli bir çeşidi kullanılmaktadır.
Taq Polimeraz nedir?
Taq DNA polimeraz buluşu moleküler biyoloji alanında devrim yarattı. DNA amplifikasyonunda büyük bir sorunu çözdü. Taq DNA polimeraz, termofilik bakteri Thermus aquaticus'tan ekstrakte edilmiş ve izole edilmiş, ısıya dayanıklı bir polimeraz enzimidir. Bu enzimlerin keşfi, PCR'nin gelişmesine yol açar. Bu enzim, geleneksel zahmetli klonlama teknikleri yerine DNA amplifikasyonunda polimeraz zincir reaksiyonunun kullanılmasına izin vermiştir. PCR artık tekniğe eklenen birçok yeni varyasyonla moleküler teşhis, tarım ve endüstriyel alanlarda kullanılmaktadır.
Şekil 02: Taq Polimeraz
Taq DNA polimeraz, 720C – 800C arasındaki optimum sıcaklık aralığında çalışır. Taq DNA polimeraz bir kofaktör gerektirir; işlevi için magnezyum. Taq polimeraz 3' – 5' düzeltme okuma yeteneğine sahip değildir, bu nedenle Taq DNA polimerazın hata oranı, Phusion polimeraz vb. gibi daha yeni DNA polimeraz türlerine kıyasla yüksektir. enzimin rahatlığı ve esnekliği nedeniyle bilim dünyasında aynıdır.
Phusion ve Taq polimeraz Arasındaki Benzerlikler Nelerdir?
- Hem Phusion hem de Taq polimeraz enzimleri, DNA zincirinin 3' serbest ucuna nükleotid ekleyebilen polimerize edici enzimlerdir.
- Hem Phusion hem de Taq polimerazlar, polimerizasyonu başlatmak için bir primer dizisi gerektirir.
- Hem Phusion hem de Taq polimerazlar ısıya dayanıklıdır.
- Phusion ve Taq polimerazlar, DNA'yı amplifiye etmek için PCR mekanizmalarında kullanılır.
- Polimeraz reaksiyon karışımına eklenirken, enzimin etkinliğini sağlamak için hem Phusion hem de Taq polimerazlar en son eklenir.
- Hem Phusion hem de Taq polimerazlar moleküler biyoloji deneysel amaçlar için ticari olarak sentezlenir.
- Hem Phusion hem de Taq polimeraz, işlevini tamamlamak için bir kofaktör gerektirir.
Phusion ve Taq Polimeraz Arasındaki Fark Nedir?
Phusion vs Taq Polimeraz |
|
| Phusion, Pyrococcus furiosus'tan izole edilen bir DNA polimerazdır ve esas olarak aslına uygunluğu artırmak için klonlama deneylerinde kullanılır. | Taq DNA Polimeraz, Polimeraz Zincir Reaksiyonunda (PCR) kullanılan standart DNA polimerazdır ve termostabil bakteri Thermus aquaticus'tan izole edilmiştir. |
| Kaynak Organizma | |
| Phusion ekstremofilik arkelerden elde edilir – Pyrococcus furiosus. | Bu edebi eserler, sömürgecilik döneminden sömürgecilikten kurtuluş dönemine kadar uzanır. |
| Prova Okuma Yeteneği | |
| 3' – 5' prova okuma yeteneği Phusion'da mevcuttur. | 3' – 5' ispat okuma yeteneği Taq polimerazda yoktur. |
| Sadakat | |
| Phusion ile yüksek doğruluk var. | Taq polimeraz düşük sadakat gösterir. |
| Amplifikasyon | |
| Phusion, uzun DNA parçalarını çoğ altabilir. | Taq polimeraz, çok daha kısa DNA parçalarını çoğ altabilir. |
| dUTP Zehirlenmesi | |
| Phusion eylemi, tek birikim tarafından engellendi. | Taq polimeraz dUPT tarafından inhibe edilmez. |
Özet – Phusion vs Taq polimeraz
Phusion ve Taq DNA polimeraz, PCR tekniklerinde kullanılan iki ısıya dayanıklı polimerazdır. Phusion, ekstremofil Pyrococcus furiosus'tan izole edilen bir polimeraz iken, Taq, termostabil bakteri Thermus aquaticus'tan izole edilir. Taq DNA polimeraz keşfi, PCR buluşuna yol açar. Phusion'ın, yüksek sadakatli DNA üretiminde Phusion'ı daha iyi bir seçenek haline getiren Taq'a göre birçok avantajı vardır. Bununla birlikte, Taq polimeraz, PCR'de hala standart polimeraz enzimi olarak kullanılmaktadır. Bu, Phusion ve Taq polimeraz arasındaki farktır.
