Anahtar Farkı – Akış Sitometrisi ve FACS
Hücre teorisi bağlamında hücreler, tüm canlı organizmaların temel yapısal ve işlevsel birimidir. Hücre sıralama, farklı hücreleri fizyolojik ve morfolojik özelliklerine göre ayırmak için kullanılan bir metodolojidir. Hücre içi veya hücre dışı özelliklere sahip olabilirler. DNA, RNA ve proteinlerin etkileşimi hücre içi etkileşimli özellikler olarak kabul edilirken şekil, boyut ve farklı yüzey proteinleri hücre dışı özellikler olarak kabul edilir. Günümüz biliminde, hücre sınıflandırma metodolojileri, biyolojik çalışmalarda farklı araştırmalara ve ayrıca tıp araştırmaları yoluyla yeni ilkelerin oluşturulmasına yardımcı olmuştur. Hücre ayırma, hem daha az ekipmanla ilkel, hem de karmaşık makineler kullanılarak ileri teknolojik metodolojileri içeren çeşitli metodolojiler üzerinde gerçekleştirilir. Akış sitometrisi, floresanla aktive edilmiş hücre sınıflandırması (FACS), manyetik hücre seçimi ve tek hücreli sınıflandırma, kullanılan başlıca metodolojilerdir. Akış sitometrisi ve FACS, hücreleri optik özelliklerine göre ayırt etmek için geliştirilmiştir. FACS, özel bir akış sitometrisi türüdür. Akış sitometrisi, heterojen bir hücre popülasyonunun farklı hücre yüzeyi moleküllerine, boyutuna ve hacmine göre analizi sırasında kullanılan ve tek hücrelerin araştırılmasına izin veren bir metodolojidir. FACS, ışık saçılımı ve flüoresans özelliklerine göre iki veya daha fazla kapta örnek bir hücre karışımının ayrıldığı bir işlemdir. Bu, akış sitometrisi ile FACS arasındaki temel farktır.
Akış Sitometrisi Nedir?
Akış sitometrisi, hücre içi moleküllerin ve hücre yüzeyinin ekspresyonunu incelemek ve belirlemek ve farklı hücre tiplerini tanımlamak ve karakterize etmek için kullanılan bir yöntemdir. Ayrıca hücre hacmini ve hücre boyutunu belirlemede ve izole edilen alt popülasyonların saflığını değerlendirmede kullanılır. Bu, yaklaşık olarak aynı anda tek hücrelerin çok parametreli değerlendirmesine izin verir. Akış sitometrisi, ilişkili hücrelere bağlanan proteinleri veya ligandları tanımlamaya yardımcı olan floresan etiketli antikorlar nedeniyle üretilen floresan yoğunluğunun ölçülmesinde kullanılır.
Şekil 01: Akış Sitometrisi
Genel olarak, akış sitometrisi temel olarak üç alt sistem içerir. Bunlar akışkanlar, elektronikler ve optiklerdir. Akış sitometrisinde hücre sıralamada kullanılan beş ana bileşen mevcuttur. Bunlar, bir akış hücresi (bunları taşımak ve hücreleri optik algılama işlemi için hizalamak için kullanılan bir sıvı akışı), bir ölçüm sistemi (cıva ve ksenon lambaları, yüksek güçlü su soğutmalı veya düşük güçlü hava soğutmalı lazerler veya diyot lazerler), bir ADC; Analogdan Dijitale Dönüştürücü sistemi, amplifikasyon sistemi ve analiz için bir bilgisayar. Edinme, akış sitometresi kullanılarak numunelerden verilerin toplandığı süreçtir. Bu işleme, akış sitometresine bağlı bir bilgisayar aracılık eder. Bilgisayarda bulunan yazılım, akış sitometresinden bilgisayara beslenen bilgileri analiz eder. Yazılım ayrıca akış sitometresini kontrol eden deneyin parametrelerini ayarlama yeteneğine de sahiptir.
FACS nedir?
Akış sitometrisi bağlamında, Floresanla aktive olan hücre sınıflandırması (FACS), biyolojik hücre karışımının bir örneğinin ayırt edilmesinde ve ayrılmasında kullanılan bir yöntemdir. Hücreler iki veya daha fazla kaptan ayrılır. Sıralama yöntemi, hücrenin ışık saçılımı ve flüoresans özelliklerini içeren hücrenin fiziksel özelliklerine dayanmaktadır. Bu, her hücreden yayılan floresan sinyallerinin güvenilir nicel ve nitel sonuçlarını elde etmek için kullanılabilecek önemli bir bilimsel tekniktir. FACS sırasında, başlangıçta önceden elde edilen hücre karışımı; bir süspansiyon, hızla akan dar bir sıvı akışının merkezine yönlendirilir. Sıvı akışı, her hücrenin çapına göre süspansiyondaki hücreleri ayırmak için tasarlanmıştır. Süspansiyon akışına, ayrı damlacıkların oluşumuyla sonuçlanan bir titreşim mekanizması uygulanır.
Şekil 02: FACS
Sistem, tek hücreli tek bir damlacık oluşturacak şekilde kalibre edilir. Damlacıkların oluşumundan hemen önce, akış süspansiyonu, her hücrenin floresan özelliğini algılayan bir floresan ölçüm cihazı boyunca hareket eder. Damlacıkların oluşum noktasında, floresan yoğunluğunun ölçülmesinden önce halkaya bir yükün indüklendiği bir elektrik yükleme halkası yerleştirilir. Damlacıklar süspansiyon akışından oluşturulduktan sonra, damlacıkların içinde bir yük tutulur ve bu daha sonra bir elektrostatik sapma sistemine girer. Yüke göre sistem damlacıkları farklı kaplara yönlendirir. Yükün uygulanma yöntemi, FACS'de kullanılan farklı sistemlere göre değişir. FACS'de kullanılan ekipman, floresanla etkinleştirilmiş hücre sıralayıcı olarak bilinir.
Akış Sitometrisi ve FACS Arasındaki Benzerlik Nedir?
Akış sitometrisi ve FACS, hücreleri optik özelliklerine göre ayırt etmek için geliştirilmiştir
Akış Sitometrisi ve FACS Arasındaki Fark Nedir?
Akış Sitometrisi ve FACS |
|
| Akış sitometrisi, farklı hücre yüzeyi moleküllerine, boyutuna ve hacmine göre heterojen bir hücre popülasyonunun analizi sırasında kullanılan ve tek hücrelerin araştırılmasına izin veren bir metodolojidir. | FACS, örnek bir hücre karışımının ışık saçılımı ve floresan özelliklerine göre iki veya daha fazla kapta sıralandığı bir işlemdir. |
Özet – Akış Sitometrisi ve FACS
Hücre, tüm canlı organizmaların temel yapısal ve işlevsel birimidir. Hücre sıralama, hücrelerin izole edildiği ve hücre içi ve hücre dışı özelliklerine göre farklı kategorilere ayrıldığı süreçtir. Akış sitometrisi ve FACS, hücre sıralamada iki önemli metodolojidir. Her iki işlem de hücreleri optik özelliklerine göre ayırt etmek için geliştirilmiştir. Akış sitometrisi, heterojen bir hücre popülasyonunun farklı hücre yüzeyi moleküllerine, boyutuna ve hacmine göre analizi sırasında kullanılan ve tek hücrelerin araştırılmasına izin veren bir metodolojidir. FACS, ışık saçılımı ve flüoresans özelliklerine göre iki veya daha fazla kapta örnek bir hücre karışımının ayrıldığı bir işlemdir. Akış Sitometrisi ve FACS arasındaki fark budur.
Akış Sitometrisi ile FACS'nin PDF Sürümünü İndirin
Bu makalenin PDF sürümünü indirebilir ve alıntı notuna göre çevrimdışı amaçlarla kullanabilirsiniz. Lütfen PDF sürümünü buradan indirin Akış Sitometrisi ve FACS Arasındaki Fark
