Kromotofokus ile izoelektrik odaklama arasındaki temel fark, kromatofokusun iyon değişim reçinelerini kullanan bir tür kolon kromatografisi yöntemi olması, izoelektrik odaklamanın ise hareketsizleştirilmiş pH gradyan jellerini kullanan bir tür elektroforez tekniği olmasıdır.
Kromat odaklama ve izoelektrik odaklama, proteinleri izoelektrik noktalarına göre ayıran iki tekniktir. Hem kromatofokus hem de izoelektrik odaklama büyük bir çözme gücüne sahiptir. Kromatofokus, yüksek çözünürlüklü bir kolon kromatografi yöntemidir, izoelektrik odaklama ise elektroforetik bir ayırma yöntemidir. Ayrıca, kromatofokus bir elektrik alanı kullanmazken, izoelektrik odaklama bir elektrik alanına ihtiyaç duyar.
Kromat odaklama nedir?
Kromat odaklama, proteinleri izoelektrik noktalarındaki farklılıklara göre ayıran bir tür yüksek elüsyonlu kromatografidir. Bir iyon değişim reçinesi kolonu ve dahili olarak geliştirilmiş bir pH gradyanı kullanır. İzoelektrik odaklamanın aksine, kromato odaklama bir elektrik alanı içermez. Kromatofokuslama, yalnızca 0.02 pH birimi ile farklılık gösteren oldukça benzer molekülleri çözebilen güçlü bir saflaştırma tekniğidir. Bu nedenle kromatofokus, çok benzer bileşenleri ayırmak için yüksek çözünürlük gerektiğinde son bir cilalama adımı olarak en uygunudur.
Kromatfokuslamada örnek, başlangıç tamponu ile karıştırılarak kolona uygulanır. İzoelektrik noktalarının üzerinde bir pH'ta olan proteinler negatif yüklüdür ve kolonun tepesine yakın kalırlar, izoelektrik noktalarının altındaki pH'ta olan diğer proteinler kolondan aşağı doğru hareket eder. En yüksek izoelektrik noktasına sahip protein ilk olarak ayrıştırılırken, en düşük izoelektrik noktasına sahip protein kolondan en son ayrıştırılır. Bu teknik, protein çökelmesi ve pH gradyanının doğrusallığı gibi çeşitli faktörlerden etkilenir.
İzoelektrik Odaklama Nedir?
İzoelektrik odaklama, farklı molekülleri izoelektrik noktalarına göre ayıran bir tekniktir. Elektro odaklama olarak da bilinir. Bu teknik genellikle bir jelde protein ayrımı için kullanılır. İzoelektrik odaklamada numune, hareketsizleştirilmiş pH gradyan (IPG) jellerine eklenir. IPG jeli, bir pH gradyanı ile kopolimerize edilmiş bir akrilamid jel matrisidir. Proteinler, izoelektrik noktalarının pH bölgesini bulana kadar katoda doğru göç ederler. Bir protein net yükü olmayan pH'a ulaştığında göç durur ve durağan bir bant verir. Benzer şekilde, her protein pH gradyanında izoelektrik noktasına karşılık gelen bir noktada bir bant verir.
Şekil 01: İzoelektrik Odaklama
İzoelektrik odaklama, iki boyutlu jel elektroforezinin ilk adımıdır. Bu teknikte proteinler önce izoelektrik odaklama ile izoelektrik noktalarına göre ayrılır ve daha sonra SDS-PAGE aracılığıyla moleküler ağırlıklarına göre ayrılır.
Kromotofokus ile İzoelektrik Odaklama Arasındaki Benzerlikler Nelerdir?
- Kromatik odaklama ve izoelektrik odaklama, son derece çözümleyici iki yöntemdir.
- Her ikisi de proteinlerin izoelektrik noktasına dayanır.
- Bu teknikler bir pH gradyanı kullanır.
- Her iki prosedür de insan hemoglobin varyantlarının karakterizasyonu için bilgilendiricidir.
- pI değerlerinin 0,02 pH birimi kadar az farklılık gösterdiği molekülleri çözebilirler.
Kromotofokus ile İzoelektrik Odaklama Arasındaki Fark Nedir?
Kromat odaklama, proteinleri izoelektrik noktalarına göre ayıran yüksek çözünürlüklü bir kolon kromatografi tekniğidir. Buna karşılık, izoelektrik odaklama, bir kılcal damarda oluşan bir pH gradyanı boyunca bir elektrik alanı uygulayarak proteinleri izoelektrik noktalarına göre ayıran bir elektroforetik tekniktir. Bu, kromatofokus ile izoelektrik odaklama arasındaki temel farktır.
Kromotofokus ile izoelektrik odaklama arasındaki diğer bir fark, kromatofokusun bir elektrik alanı içermemesi ve izoelektrik odaklamanın bir elektrik alanına ihtiyaç duymasıdır.
Özet – Kromatofokus ve İzoelektrik Odaklama
Kromatik odaklama ve izoelektrik odaklama, molekülleri, özellikle de çok benzer molekülleri yüksek çözme yeteneğine sahip iki benzer tekniktir. Kromatofokuslama, yüksek çözünürlüklü bir kolon kromatografisi tekniğidir, izoelektrik odaklama ise bir elektroforez yöntemidir. Kromatofokus, izoelektrik odaklamanın aksine bir elektrik alanı içermez. Bu, kromatofokus ile izoelektrik odaklama arasındaki farkı özetler.
