BL21 ve DH5 Alpha arasındaki temel fark, BL21'in öncelikle protein ekspresyonu için kullanılan, proteaz eksikliği olan, genetik olarak tasarlanmış yetkin bir E. coli hücresi olması, DH5 Alfa'nın ise, öncelikle kullanılan recA1 mutasyonuna sahip, genetik olarak tasarlanmış yetkin bir E. coli hücresi olmasıdır. plazmit transformasyonu için.
E. coli, rekombinant protein üretimi için tercih edilen ünlü organizmalardan biridir. Yıllar içinde en popüler ifade platformu haline geldi. Hücre fabrikası olarak da kullanılmaktadır. BL21 ve DH5 Alpha, sırasıyla protein ekspresyonu ve plazmit transformasyonu için halihazırda kullanılan genetik olarak tasarlanmış iki E. coli hücresidir.
BL21 nedir?
BL21, öncelikle protein ekspresyonu için kullanılan, genetik olarak tasarlanmış yetkin bir E.coli hücresi olan proteaz eksikliği olan bir hücredir. E. coli BL21, B suşundan türetilen bir bakteri hücresidir. Lon proteaz ve ompT dış membran proteaz kusurlarına sahiptir. Normal olarak eksprese edilen proteinlere stabilite getirdiği için rekombinant protein ekspresyonu için yaygın olarak kullanılır. BL21, pCold I-IV DNA ve pCold TF DNA ile protein ekspresyonu için kullanışlıdır. Ancak bu yetkin E. coli hücresi, pET sistemi gibi T7 promotörü kullanan bir protein ekspresyon sistemi için tasarlanmamıştır. Bunun nedeni BL21'in T7 RNA polimerazı eksprese etmemesidir. Ayrıca recA mutasyonu olmadığı için plazmid yapımında veya hazırlanmasında kullanılması önerilmez.
Şekil 01: BL21
BL21 ilk olarak 1986 yılında Studier tarafından B hattının çeşitli modifikasyonlarından sonra tanımlanmıştır. BL21 hücreleri, birçok yabancı proteini parçalayan LON proteazında eksiktir. Ayrıca, işlevi hücre dışı proteinleri parçalamak olan dış zar proteazını (OmpT) kodlayan başka bir gen eksiktir. Bu proteinlerin eksikliği, E. coli BL21 hücrelerinde yabancı proteinin başarılı üretimini tetikler. Ayrıca, bu hücrelerdeki hsdSB mutasyonu, BL21 hücrelerinde yabancı DNA metilasyonunu ve bozulmasını önler.
DH5 Alfa nedir?
DH5 Alpha, öncelikle plazmit transformasyonu için kullanılan, recA1 mutasyonuna sahip, genetik olarak tasarlanmış yetkin bir E. coli hücresidir. DH5 Alpha E. coli hücreleri, dönüşümün verimliliğini en üst düzeye çıkarmak için Amerikalı biyolog Douglas Hanahan tarafından genetik olarak tasarlanmıştır. DH5 Alfa hücresinin üç farklı mutasyonu vardır: recA1, endA1 ve lacZΔM15. recA1, glisin 160'ı recA polipeptidinde bir aspartik asit tortusu ile değiştiren tek noktalı bir mutasyondur. Bu mutasyon, rekombinazların aktivitesini devre dışı bırakır ve homolog rekombinasyonu inaktive eder. endA1 mutasyonu, eklenen plazmidi parçalamasını önleyen hücre içi bir endonükleazı etkisiz hale getirir.
Şekil 02: DH5 Alfa
Ayrıca, lacZΔM15 mutasyonu, dönüştürülmüş hücrelerin mavi-beyaz taranmasını sağlar. Bu hücreler yetkin hücrelerdir. Genellikle istenen plazmidi yerleştirmek için kalsiyum klorür dönüşümü ile birlikte kullanılırlar. Son araştırmalarla Hanahan yöntemiyle DH5 Alpha hücresinin plazmit transformasyonu için en verimli hücre olduğu tespit edildi.
BL21 ve DH5 Alpha Arasındaki Benzerlikler Nelerdir?
- BL21 ve DH5 Alpha, genetiğiyle oynanmış iki E.coli
- İkisi de yetkin hücrelerdir.
- Ayrı mutasyonlardan oluşurlar.
- İkisinin de doğal yaşam alanı yok.
- Bunlar, ekspresyon çalışmaları ve klonlama prosedürleri gibi laboratuvar amaçları için kullanılır.
BL21 ve DH5 Alpha Arasındaki Fark Nedir?
BL21, öncelikle protein ekspresyonu için kullanılan, genetik olarak tasarlanmış yetkin bir E. coli hücresidir. Öte yandan, DH5 Alpha, esas olarak plazmit transformasyonu için kullanılan recA1 mutasyonuna sahip, genetik olarak tasarlanmış yetkin bir E. coli hücresidir. Bu, BL21 ve DH5 Alpha arasındaki temel farktır. Ayrıca BL21 E. coli hücresinde recA1 mutasyonu yoktur, DH5 Alpha E. coli hücresinde ise recA1 mutasyonu vardır.
Aşağıdaki infografik, BL21 ve DH5 Alpha arasındaki farkları tablo şeklinde listeler.
Özet – BL21 ve DH5 Alpha
E. coli'nin patojenik olmayan suşları, laboratuvar ekspresyon çalışmaları ve klonlama amaçları için bilim adamları tarafından genetik olarak geliştirilmiştir. BL21 ve DH5 Alpha, genetiğiyle oynanmış iki E. coli hücresidir. BL21 öncelikle protein ekspresyonu çalışmaları için kullanılır. Öte yandan, DH5 Alpha öncelikle plazmit transformasyonu amaçları için kullanılır. Bu nedenle, BL21 ve DH5 Alpha arasındaki farkın özeti budur.
