Jel filtrasyonu ile afinite kromatografisi arasındaki temel fark, jel filtrasyon kromatografisinin analit numunesinin moleküler ağırlığı veya boyutundaki farklılıklara bağlı olması, afinite kromatografisinin ise bir analitin hareketsizleştirilmiş bir liganda afinitesine bağlı olmasıdır.
Analitik kimyadaki kromatografi terimi, bir karışımdaki bileşenlerin farklı teknikler kullanılarak ayrılması sürecini ifade eder. Kromatografi, ayırma için çeşitli sayıda farklı yöntemi temsil eden toplu bir addır.
Jel Filtrasyon Kromatografisi Nedir?
Jel filtrasyon kromatografisi, bileşenlerin ayrılmasının moleküler ağırlık veya boyuttaki farklılığa bağlı olduğu analitik bir tekniktir. Bu teknik aynı zamanda boyut dışlama kromatografisi veya moleküler elek kromatografisi olarak da bilinir. Bu işlemdeki ayırma tekniği, numunedeki moleküllerin jel filtrasyon ortamının gözeneklerine girmedeki farklı yeteneklerine bağlıdır.
Jel filtrasyon tekniğinde, sabit faz, dar bir boyut aralığı içeren moleküler boyutlarda gözeneklere sahip hidratlı, sünger benzeri malzemeden boncuklar içerir. Çeşitli büyüklükteki moleküllerden oluşan sulu bir çözeltiyi bu "moleküler elekler" içeren bir kolondan geçirirsek, süzme ortamının gözeneklerinden daha büyük olan moleküller kolondan hızla geçerler. Buna karşılık, daha küçük moleküller jelin gözeneklerine girer ve kolon boyunca yavaşça hareket etme eğilimindedir. Moleküller, azalan moleküler boyut sırasına göre kolondan ayrılır. Burada jelin dışlama limiti, belirli bir jelin gözeneklerine nüfuz edemeyen en küçük moleküllerin moleküler kütlesidir.
Dolaylı jel filtrasyon yöntemi, kararlı durum jel filtrasyonu, jel boncuk diyalizi vb. gibi farklı jel filtrasyon teknikleri vardır. Dolaylı jel filtrasyon kromatografisi, serbest tiroid hormonlarının belirlenmesinde faydalıdır. Kararlı durum jel filtrasyon kromatografisi, çoğunlukla kortizol, testosteron vb. gibi serbest steroidlerin ölçümü için yararlı olan dolaylı bir tekniktir. Öte yandan, jel boncuk diyalizi, nispeten daha basit olan kararlı durum jel filtrasyonunun bir modifikasyonudur.
Afinite Kromatografisi nedir?
Afinite kromatografisi, hareketsizleştirilmiş bir ligand ile onun bağlanma ortağı arasındaki spesifik bir bağlanma etkileşimine dayanan bir analitik teknik ve bir ayırma yöntemidir. Bazı örnekler, antikor-antijen bağlanması, enzim-substrat bağlanması ve enzim-inhibitör bağlanmasını içerir. Bu nedenle, bu tekniğin nükleik asit saflaştırmasında, hücre ekstraktlarından protein saflaştırmasında ve kandan saflaştırmada birçok önemli uygulaması vardır.
Bu teknikte en önemli özellik ligand immobilizasyonudur. Bunun için akrilat, silika jel gibi çeşitli malzemeler kullanabiliriz. Hedef molekülün liganda sterik karışmasını önlemek önemlidir. Ayrıca katı faza bir inhibitör eklenir. Bu inhibitöre aralayıcı diyoruz. Klasik olarak, ayırıcı bir hidrokarbon zincirinden oluşur.
Afinite kromatografisinin durağan fazı çekirdek, ayırıcı ve ligandı içerir. Bazen liganda bağlı bir metal iyonu da vardır. Bu teknikte durağan faz için en çok tercih edilen katı faz agaroz jeldir, çünkü kolonu herhangi bir boyutta reçine yataklarıyla doldurmak ve paketlemek için kolayca dağıtılır ve biyomoleküllerin boncukların içine ve içinden serbestçe akması için yeterince büyüktür. Ligandlar, boncuk polimerine çeşitli şekillerde kovalent olarak bağlanabilir. En yaygın aralayıcı bileşikler siyanojen bromür, epoksit, C6 asitli epoksit ve diamindir. Öte yandan, kullanabileceğimiz ligand hedefe göre farklılık gösterir, örneğin antikor-antijen, demir veya alüminyum iyonları-fosfoproteinler, avidin-biyotin, glutatyon-GST, şelatör-His-tagged proteinler vb.
Jel Filtreleme ve Afinite Kromatografisi Arasındaki Fark Nedir?
Kromatografi önemli bir analitik tekniktir. Jel filtrasyon kromatografisi ve afinite kromatografisi, kromatografinin iki önemli varyasyonudur. Jel filtrasyon ve afinite kromatografisi arasındaki temel fark, jel filtrasyon kromatografisinin analit numunesinin moleküler ağırlığı veya boyutundaki farklılıklara bağlı olması, afinite kromatografisinin ise bir analitin hareketsizleştirilmiş bir liganda afinitesine bağlı olmasıdır.
Özet – Jel Filtreleme ve Afinite Kromatografisi
Uygulamalarına ve analit örneğinin doğasına göre farklı kromatografik teknikler vardır. Jel filtrasyonu ve afinite kromatografisi bu tür iki tekniktir. Jel filtrasyon ile afinite kromatografisi arasındaki temel fark, jel filtrasyon kromatografisinin analit numunesinin moleküler ağırlığı veya boyutundaki farklılıklara bağlı olması, afinite kromatografisinin ise bir analitin hareketsizleştirilmiş bir liganda afinitesine bağlı olmasıdır.
