Anahtar Farkı – Gram Leke ve Asit Hızlı
Bakteriler çok küçük mikroorganizmalardır. Şeffaftırlar ve canlı ve lekesiz koşullarda tespiti zordur. Bu nedenle bakteri tespitini kolaylaştırmak için çeşitli boyama yöntemleri geliştirilmiştir. Üç ana boyama tekniği türü vardır: basit boyama, farklı boyama ve yapısal boyama. Diferansiyel boyama, bakterileri ayırt etmek için birden fazla leke kullanan bir tekniktir. Gram boyama ve aside dirençli boyama en popüler olarak diferansiyel boyalar olarak bilinir. Gram boyama, bakterileri Gram pozitif bakteriler ve Gram negatif bakteriler olarak bilinen iki gruba ayıran bir diferansiyel boyama tekniğidir. Aside dirençli boyama, Mycobacterium gibi aside dirençli organizmaları aside dayanıklı olmayan organizmalardan ayırmak için kullanılan bir diferansiyel lekedir. Gram boyama ile Asit Hızlı boyama arasındaki temel fark budur.
Gram Lekesi Nedir?
Gram boyama, mikrobiyolojide bakteri tanımlaması için kullanılan önemli bir diferansiyel boyama tekniğidir. Bu teknik, 1884 yılında Danimarkalı Bakteriyolog Hans Christian Gram tarafından tanıtıldı. Gram boyama, bakterileri, bakteri sınıflandırması ve tanımlamasında çok önemli olan gram pozitif ve gram negatif olmak üzere iki ana gruba ayırır. Mikrobiyologlar, çalışmaları sırasında bakteri karakterizasyonunda ilk adım olarak gram boyama yaparlar.
Bakteriler hücre duvarlarındaki farklılıklara göre gruplandırılır. Gram pozitif bakteriler hücre duvarlarında kalın bir peptidoglikan tabakasından oluşurken, gram negatif bakteriler hücre duvarlarında ince bir peptidoglikan tabakasından oluşur. Gram boyamanın sonucu, hücre duvarının peptidoglikan tabakasının kalınlığındaki farka dayanacaktır.
Gram boyama, dört farklı reaktif kullanılarak gerçekleştirilir; birincil leke, mordan, renk giderici ajan ve karşı leke. Kristal violet ve safranin sırasıyla birincil ve karşı boya olarak kullanılırken, mordan ve renk giderici olarak sırasıyla gram iyot ve %95 alkol kullanılır. Gram boyamanın temel adımları şu şekildedir;
- Temiz bir cam slayt üzerinde bir bakteri yayması hazırlanır, ısıyla sabitlenir ve soğutulur.
- Smear, 1 – 2 dakika boyunca kristal menekşe ile doldurulur.
- Smear, fazla lekeleri çıkarmak için yavaş akan musluk suyuyla durulanır.
- Gram iyot yaymaya 1 dakika süreyle uygulanır.
- Smear yavaş akan musluk suyuyla durulanır
- Smear %95 alkol ile 2 – 5 saniye yıkanır ve yavaş akan musluk suyu ile durulanır.
- Smear 1 dakika boyunca safranin ile karşı lekelenir
- Smear yavaş akan musluk suyuyla yıkanır, kurutulur ve mikroskop altında gözlemlenir.
Gram boyama sonunda gram negatif bakteriler pembe renkte, gram pozitif bakteriler ise mor renkte gözlenecektir.
Şekil 01: Gram negatif ve Gram pozitif bakteriler
Gram boyamasının sonucuna hücre duvarlarındaki peptidoglikan tabakasının kalınlığı karar verir. Renk giderme adımı sırasında, birincil leke ve mordan, gram negatif bakterilerden kolayca çıkarılır ve ince bir peptidoglikan tabakasına sahip oldukları için renksiz hale gelir. Birincil boya, kalın bir peptidoglikan tabakasına sahip oldukları için gram pozitif bakterilerde tutulur. Karşı leke, birincil lekenin tutulması nedeniyle gram pozitif bakteriler için etkili olmayacaktır. Böylece gram pozitif bakteriler birincil leke renginde yani mor renkte görünür olacaktır. Karşı leke, gram negatif bakterileri lekeleyecek ve safranin rengi olan alma renginde görüneceklerdir. Bu nedenle gram boyama ile bakterileri iki gruba ayırmak kolaydır ve bakteri farklılaşması ve tanımlanmasında değerlidir.
Asit Hızlı Nedir?
Asit haslığı, belirli bakterilerin fiziksel bir özelliğidir, özellikle boyama prosedürleri sırasında asitlerle renk bozulmasına karşı dirençleridir. Bir kez boyandığında, bu organizmalar, birçok boyama protokolünde yaygın olan seyreltik asit ve/veya etanol bazlı renk giderme prosedürlerine direnirler. Bu nedenle, bu organizmalara 'asit hızlı' adı verilir. Bu özellik, hücre duvarlarında yüksek düzeyde mumsu madde (mikolik asitler) bulunması nedeniyle gösterilir. Bu test, Mycobacterium tuberculosis'in tanımlanması için kritik öneme sahiptir.
Şekil 2: Asit Hızlı Mikobakteriler
Bu asit hızlı leke 1882'de Paul Ehrlich tarafından geliştirilmiştir. Ehrlich'in asit hızlı tekniği Ziehl-Neelsen tarafından modifiye edilmiştir ve artık daha sık kullanılmaktadır. Asit hızlı boyama prosedürü üç farklı reaktif içerir. Carbol fuschin birincil leke olarak kullanılır. Renk giderici ajan olarak asit alkol kullanılır. Karşı leke olarak metilen mavisi kullanılır. Boyama prosedürü aşağıdaki gibi gerçekleştirilir.
- Birincil boya (karbol fuksin) slayt üzerindeki sabit numuneye uygulanır (Tüm hücreler kırmızı renkte boyanacaktır).
- Slayt 5 dakika buharla ısıtılır, bu da lekeleri hücrelere düzgün bir şekilde sürer.
- Ardından renk giderici solüsyon eklenir (Bu, aside dirençli bakteriler hariç tüm hücrelerdeki kırmızı boyayı giderir).
- Metilen mavisi karşı leke olarak eklenir (Tüm rengi giderilmiş bakteri hücrelerini renklendirir).
- Asit hızlı bakteriler kırmızı kalırken, asit olmayan hızlı bakteriler mavi lekelenir.
Gram Boyası ve Asit Hızlı Arasındaki Benzerlikler Nelerdir?
- Gram boyama ve Asit hızlı iki farklı boyama tekniğidir.
- Her iki teknik de bakterileri iki gruba ayırır.
- Her iki teknikte de iki leke ve bir renk giderici kullanılır.
Gram Leke ile Asit Hızlı Arasındaki Fark Nedir?
Gram Leke vs Asit Hızlı |
|
| Gram boyama, bakterileri Gram pozitif bakteriler ve Gram negatif bakteriler olarak iki gruba ayıran bir diferansiyel boyama tekniğidir. | Asit Hızlı leke, aside dirençli organizmaları aside dirençli olmayan organizmalardan ayırmak için kullanılan bir diferansiyel lekedir. |
| Birincil Leke | |
| Kristal menekşe, gram boyamada yaygın olarak kullanılan birincil boyamadır. | Karbol fuksin, asit hızlılarında kullanılan birincil lekedir. |
| Renk Giderici Ajan | |
| %95 alkol, gram boyamada renk giderici ajan olarak kullanılır. | Asit alkol hızlı asitte renk giderici ajan olarak kullanılır. |
| Karşı Leke | |
| Gram lekesi, karşı leke olarak safranin kullanır. | Aside hızlı leke karşıt leke olarak metilen mavisi kullanır. |
| Gözlem | |
| Gram negatif bakteriler toplama renginde ve gram pozitif bakteriler mor renkte gözlenir. | Aside dayanıklı bakteriler kırmızı renkte, asit hızlı olmayan bakteriler mavi renkte görülür. |
Özet – Gram Leke vs Asit Hızlı
Mikroorganizmaların canlı halde görüntülenmesi zordur. Bu nedenle, biyolojik boyalar ve boyama prosedürleri, özelliklerini incelemek için yaygın olarak kullanılmaktadır. Diferansiyel boyama, bakterileri ayırt etmek için kullanılan bir boyama tekniği türüdür. Gram boyama ve asit hızlı boyama iki farklı boyama tekniğidir. Gram boyama, hücre duvarlarının kalınlığına göre gram negatif bakterileri ve gram pozitif bakterileri ayırt eder. Asit hızlı boyama, hücre duvarındaki mikolik asit içeriğine dayalı olarak asit hızlı bakterileri asit hızlı olmayan bakterilerden ayırır. Bu asit hızlı ve gram boyama arasındaki farktır.
Gram Stain vs Acid Fast'in PDF Versiyonunu İndir
Bu makalenin PDF sürümünü indirebilir ve alıntı notuna göre çevrimdışı amaçlarla kullanabilirsiniz. Lütfen PDF sürümünü buradan indirin Gram Leke ve Asit Hızlı Arasındaki Fark.
