Anahtar Farkı – Yatay ve Dikey Jel Elektroforezi
Jel elektroforezi, DNA, RNA ve diğer proteinleri içeren karışımları ilgili yüklerine ve moleküler boyutlarına göre ayırmak için genetikte kullanılan bir laboratuvar tekniğidir. Bu yöntemde ayrılması gereken DNA, RNA veya proteinler küçük gözenekler içeren bir jelden geçirilir. Moleküller, bir elektrik alanı tarafından jel boyunca hareket ettirilir. Moleküller jelin gözeneklerinden geçer ve hareketin hızı uzunluklarıyla ters orantılıdır. Bu nedenle, moleküler boyutu daha düşük olan moleküller, daha yüksek moleküler ağırlığa sahip moleküllerden daha hızlı hareket edecektir. Elektrik alanı, jelin iki ucundaki yük farkıyla üretilir. Bir uçta pozitif bir yük bulunur ve diğer uçta negatif bir yük bulunur. DNA ve RNA molekülleri negatif yüklü olduğundan jelin pozitif yüklü ucuna doğru çekilirler. Jel elektroforezi iki farklı yöntemle olabilir: yatay jel elektroforezi ve dikey jel elektroforezi. Yatay jel elektroforezinde, jel yatay bir oryantasyonda bulunur ve jel kutusunun kendi içinde mevcut olan sürekli çalışan bir tampona daldırılır. Dikey jel elektroforezinde, tampon sistemi dikey olarak yönlendirilir ve üstte ve altta sırasıyla bir katot ve bir anot bulunan iki oda ile süreksizdir. Yatay ve dikey jel elektroforezi arasındaki temel fark budur.
Yatay Jel Elektroforezi Nedir?
Yatay jel elektroforezi, DNA, RNA veya protein moleküllerinin ilgili moleküler boyutlarına ve yüklerine göre ayrılması için temel teoriyi kullanır. Bu teknikte, jel yatay bir oryantasyonda bulunur ve sürekli olan bir tampon içine daldırılır. Agaroz jel, jel kutusunu iki bölmeye ayırmak için kullanılır. Jel kutusunun bir ucu bir anot içerirken diğer ucu bir katot içerir. Bir akım uygulandığında, bu teknikte kullanılan tampon, bir yük gradyanı oluşturulmasına izin verir. Şarj uygulandığında jel ısınma eğilimindedir. Tampon ayrıca sıcaklığı optimum seviyelerde tutan bir soğutucu olarak da işlev görür. Çalışan tamponun devridaimi, bir pH gradyanı oluşumunu engeller. Yatay jel elektroforezinde süreksiz bir tampon sistemi kullanılamaz, çünkü jel sisteminin iki bölmesi çalışan tampon ile bağlantılıdır. Akrilamid, jel elektroforezi sırasında protein karışımlarını ayırmak için kullanılır.
Şekil 01: Yatay Jel Elektroforezi
Yatay jel elektroforezinde jel kutusu oksijene maruz kaldığı için akrilamid kullanılamaz. Oksijen varlığından dolayı akrilamidin polimerizasyonu engellenir ve bu da jel oluşumunu engeller. Yatay jel elektroforezi, DNA ve RNA'nın ayrılmasında kullanılan zahmetsiz bir yöntemdir.
Dikey Jel Elektroforezi Nedir?
Dikey jel elektroforez tekniği, jel elektroforezinin birincil teorisine göre çalışır, ancak yatay jel elektroforez yönteminden daha karmaşık olduğu düşünülür. Bu teknik, süreksiz bir tampon kullanır. Üst bölmede bir katot bulunur ve alt bölmede anot bulunur. Her bölmede bulunan elektrotlar, gerekli elektrik alanını sağlar. Monte edilmiş iki cam plaka arasına ince bir jel tabakası dökülür. Bu nedenle, jelin üst kısmı üst bölmeye daldırılır ve jelin alt kısmı alttaki bölmeye daldırılır. Akım uygulandıktan sonra, tamponun küçük bir kısmı, üst bölmeden jel yoluyla alt bölmeye hareket eder. Bu teknikte uygulanan akım dakika birimleridir.
Şekil 02: Dikey Jel Elektroforezi
Dikey jel elektroforezinde, tampon yalnızca jel içinden akar. Bu, ayırma aşaması sırasında voltaj gradyanının doğru kontrolünü sağlar. Bölmeler atmosferik oksijene maruz kalmadığından akrilamid jel kullanılabilir. Akrilamid jelin daha küçük gözenek boyutu nedeniyle, daha yüksek çözünürlükle kesin ayırma elde edilebilir.
Yatay ve Dikey Jel Elektroforez Arasındaki Benzerlikler Nelerdir?
- Her iki sistem de jel elektroforezinin temel teorisine göre çalışır.
- Anot ve katot her iki sistemde de gerekli elektrik alanını sağlamak için kullanılır.
Yatay ve Dikey Jel Elektroforez Arasındaki Fark Nedir?
Yatay ve Dikey Jel Elektroforezi |
|
| Yatay Jel Elektroforezi, jelin yatay yönde mevcut olduğu bir jel elektroforez tekniğidir. | Dikey Jel Elektroforezi, jelin dikey olarak yönlendirildiği bir jel elektroforez tekniğidir. |
| Tampon | |
| Yatay jel elektroforezi sürekli bir tampondan oluşur. | Çalışan tampon, dikey jel elektroforezinde süreksizdir. |
| Akrilamit Kullanımı | |
| Akrilamit, jel kutusu atmosferik oksijene maruz kaldığından yatay jel elektroforezi için kullanılamaz. | Jel, iki ayrı hazne nedeniyle atmosferik oksijene maruz kalmadığından, dikey jel elektroforezi için akrilamid kullanılabilir. |
| Fonksiyon | |
| Yatay jel elektroforezi daha çok DNA ve RNA karışımlarının ayrılması için kullanılır, ancak proteinler için kullanılmaz. | Dikey jel elektroforezi, protein karışımlarını ayırmak için kullanılır. |
Özet – Yatay ve Dikey Jel Elektroforezi
Jel elektroforezi, DNA, RNA ve protein molekülleri içeren karışımların ayrılmasında yaygın olarak kullanılan laboratuvar tekniğidir. Jel elektroforezinin iki yöntemi vardır: yatay ve dikey jel elektroforezi. Yatay jel elektroforezinde, çalışan tampon sürekli iken dikey jel elektroforezinde süreksizdir. Yatay ve dikey jel elektroforezi arasındaki fark budur. Her iki sistem de jel elektroforezinin ortak prensibine göre çalışır.
Yatay ve Dikey Jel Elektroforezinin PDF Versiyonunu İndir
Bu makalenin PDF sürümünü indirebilir ve alıntı notuna göre çevrimdışı amaçlarla kullanabilirsiniz. Lütfen PDF sürümünü buradan indirin Yatay ve Dikey Jel Elektroforez Arasındaki Fark.
