Radyoaktif ve radyoaktif olmayan problar arasındaki temel fark, radyoaktif probların radyoaktif izotoplarla etiketlenmiş tek zincirli DNA veya RNA dizileri olması, radyoaktif olmayan probların ise kimyasal etiket veya bir floresan etiketi.
Nükleik asit hibridizasyonu moleküler biyolojide, özellikle mikrobiyal tanıda önemli bir tekniktir. Belirli bir nükleik asit dizisini tanımlamaya veya tespit etmeye yardımcı olur. Bu teknikte, nükleik asitler katı bir yüzeye sabitlenir ve bir prob ile hibridize edilir. Bir sonda, ilgilenilen bir diziye tamamlayıcı olan bir DNA veya RNA parçasıdır. Numunede hedef dizi mevcutsa, prob onunla hibritleşecek ve onu saptanabilir hale getirecektir. Radyoaktif ve radyoaktif olmayan problar olmak üzere iki tip prob vardır. Bu nedenle probları radyoaktif etiket veya floresan etiket ile etiketleyebiliriz.
Radyoaktif Problar nedir?
Radyoaktif problar, radyoaktif etikete sahip tek sarmallı DNA veya RNA fragmanlarıdır. Radyoaktif probların hazırlanmasında radyoizotoplar kullanılır. Probların etiketlenmesinde yaygın olarak 32P, 33P ve 35S radyoizotopları kullanılır. Ayrıca, 3H ve 1251 radyoizotopları da probların etiketlenmesinde daha az ölçüde kullanılır. Ancak belirli uygulamalar için kullanılırlar. Farklı radyoizotoplar arasında 32P, radyoaktif probların etiketlenmesinde en yaygın kullanılan izotoptur.
Radyoaktif problar daha yüksek derecede güvenilirlik ve özgünlük sağlar. Bu nedenle, maksimum hassasiyet sağlarlar ve hedef dizilerin doğru bir şekilde ölçülmesine izin verirler. Bununla birlikte, radyoaktif problarla ilişkili birkaç dezavantaj vardır. Kısa yarı ömürleri vardır. Ayrıca tehlikelidirler ve üretim, kullanım ve elden çıkarma işlemleri sırasında sorunludurlar. Ek olarak, radyoaktif prob hazırlama maliyetli bir işlemdir. Bu nedenle, güvenlik sorunları ve maliyet nedeniyle radyoaktif problar günümüzde radyoaktif olmayan problar olarak kullanılmamaktadır.
Radyoaktif Olmayan Problar nelerdir?
Radyoaktif olmayan problar, kimyasal olarak etiketlenmiş ikinci tip problardır. Digoxigenin, antikor bazlı bir belirteç olan radyoaktif olmayan bir probdur. Digoxigenin probları spesifik ve hassastır. Biotin, radyoaktif olmayan prob hazırlamada kullanılan başka bir etikettir. Biotin/Streptavidin ve Digoxigenin/Antikor tespit sistemleri hibridizasyonda en yaygın kullanılan radyoaktif olmayan problardır. Ayrıca yaban turpu peroksidaz sistemi, başka bir radyoaktif olmayan sonda sistemidir. Bu radyoaktif olmayan problar, hedef dizilerle hibridize edildikten sonra, otoradyografi veya diğer görüntüleme teknikleri ile tespit edilebilirler.
Şekil 01: Radyoaktif Olmayan Problarla Hibridizasyon
Radyoaktif olmayan problar, nükleik asit hibridizasyonunda radyoaktif problardan daha sık kullanılır. Bunun nedeni, radyoaktif olmayan probların tehlikeli maddelerle ilişkili olmamasıdır. Ayrıca, radyoaktif olmayan algılama yöntemleri, hibridizasyon sinyalini algılamak için daha kısa maruz kalma süreleri gerektirir. Bununla birlikte, radyoaktif olmayan problarla DNA hibridizasyonunda yer alan adımlar genellikle sıkıcı ve zaman alıcıdır. Ayrıca, ticari olarak temin edilebilen çözümler pahalıdır.
Radyoaktif ve Radyoaktif Olmayan Problar Arasındaki Benzerlikler Nelerdir?
- Radyoaktif ve radyoaktif olmayan problar, nükleik asit hibridizasyonunda kullanılan iki tip probdur.
- Örnekteki hedef dizilerin saptanmasını kolaylaştırırlar.
- Her iki prob türü de eşit derecede hassas ve spesifiktir.
Radyoaktif ve Radyoaktif Olmayan Problar Arasındaki Fark Nedir?
Radyoaktif problar, radyoaktif izotoplarla etiketlenmiş tek iplikli DNA veya RNA dizileridir, radyoaktif olmayan problar ise kimyasal bir etiketle etiketlenmiş tek iplikli DNA veya RNA dizileridir. Bu, radyoaktif ve radyoaktif olmayan problar arasındaki temel farktır. Ayrıca radyoaktif izotoplar tehlikelidir. Bu nedenle, radyoaktif problar oldukça tehlikeliyken radyoaktif olmayan problar tehlikeli değildir.
Ayrıca, radyoaktif ve radyoaktif olmayan problar arasındaki diğer bir fark, dezavantajlarıdır. Kısa yarı ömürleri ve bunların üretimi, kullanımı ve bertarafı ile ilgili tehlikeler, radyoaktif prob kullanmanın dezavantajlarıdır. Öte yandan, radyoaktif olmayan problarla DNA hibridizasyonunda yer alan adımlar genellikle sıkıcı ve zaman alıcıdır.
Aşağıdaki infografik, radyoaktif ve radyoaktif olmayan problar arasındaki farkla ilgili daha fazla karşılaştırma gösterir.
Özet – Radyoaktif ve Radyoaktif Olmayan Problar
Bir prob, ilgilenilen diziye tamamlayıcı olan bir nükleotid dizisi içeren bir DNA veya RNA parçasıdır. Hedef diziyi tespit etmek için problar radyoaktif, floresan veya kimyasal olarak etiketlenebilir. Problar, numunedeki tamamlayıcı dizilerle bağlanır. Radyoaktif problar radyoaktif izotoplarla etiketlenirken radyoaktif olmayan problar biyotin, digoksigenin veya yaban turpu peroksidaz ile etiketlenir. Bu nedenle, radyoaktif ve radyoaktif olmayan problar arasındaki temel fark budur.
